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羽扇豆醇用于肿瘤治疗的给药剂量与方案研究及其对小鼠免疫系统的影响

作 者: 单琳
导 师: 薛智谋;刘海燕
学 校: 苏州大学
专 业: 细胞生物学
关键词: 羽扇豆醇 给药剂量 免疫系统 流式细胞术 预防 灌胃 天然食物 羽扇豆醇(Lupeol) 人白血病细胞 髓系 淋系 增殖与凋亡
分类号: R730.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:羽扇豆醇(Lupeol)广泛存在于蔬果等天然食物中,具有抗肿瘤活性,但其本身又有一定免疫抑制作用。为研究在羽扇豆醇的抗肿瘤过程中,药物本身的抗肿瘤作用及其免疫调节功能的相互作用,分别设定了大剂量长期组、大剂量短期组、小剂量长期组、以及阴性对照和阳性对照。其中大剂量短期组的设定是为了模拟短期之内由大剂量羽扇豆醇诱导肿瘤细胞凋亡,停药后,凋亡的细胞碎片激活机体自身的免疫系统,由免疫系统继续杀伤肿瘤,并且避免了长期给药对免疫系统的抑制作用。方法:建立小鼠皮下接种黑色素肿瘤模型,随机分成五组:大剂量长期组、大剂量短期组、小剂量长期组、以及阴性对照和阳性对照,短期组连续给药四天后停药,除短期组外,其余几组均给药三周,每周三次。期间测量小鼠体重变化、活动情况、肿瘤生长。实验结束后取小鼠脾、血进行流式染色分析,检测免疫系统激活状况。结果:与对照组相比,药物组几乎没有毒性,药物未引起体重的明显变化,小鼠的日常行为也没有发生改变。根据肿瘤的生长曲线看出,在设置的组别中,小剂量长期组的抑瘤效果是最明显的,其次是大剂量长期组,大剂量短期组并未出现预期的效果。免疫系统活化的程度显示:大剂量短期组的小鼠免疫系统较其他给药组,呈一定激活状态。结论:大剂量短期组的确激活了免疫系统,但是其抑制肿瘤的效果并不明显,这表明在在羽扇豆醇的抗肿瘤过程中,起主要作用的还是羽扇豆醇本身的抗肿瘤作用,免疫系统可能只起部分辅助作用。然而大剂量组又因为其免疫抑制作用而效果不如小剂量组。药物剂量显示在小剂量时,羽扇豆醇能够发挥最理想作用,这为进一步的临床应用提供一定实验参考。目的:羽扇豆醇来源于天然食物,人们可以日常食用。其抗肿瘤作用已经得到证实,但作为化学预防成分的研究很少。若证实羽扇豆醇对肿瘤有一定预防作用,则人们可以通过日常饮食降低罹患癌症的可能性。本实验主要研究灌胃给药后,肿瘤在小鼠体内的生长情况,分析其对肿瘤的预防作用。方法:10只小鼠随机分成两组,分别为对照组和预防组,连续灌胃3周后接种肿瘤,测量肿瘤生长。灌胃期间测量小鼠体重,观察其日常活动。当肿瘤生长到动物实验道德伦理极限时处死,取外周血、脾流式染色分析。结果:连续三周灌胃羽扇豆醇并未对小鼠体重产生影响,在日常活动方面也没有任何影响。预防组对肿瘤生长有一定抑制作用,但是差异不显著。预防组部分免疫细胞呈激活状态。结论:羽扇豆醇有一定的肿瘤预防作用,但效果不明显,药物效力比较温和。由于来源于天然食物,羽扇豆醇几乎没有毒性。作为预防药物,羽扇豆醇的临床推广有待进一步开发目的:研究羽扇豆醇( Lupeol )对人髓系白血病细胞K562、NB4、SHI-01,淋系白血病细胞Jurkat细胞的增殖和凋亡的作用。方法:设置5个羽扇豆醇药物浓度梯度分别处理人髓系、淋系白血病细胞,通过MTT法检测细胞活力及增殖情况,流式细胞术检测凋亡率。结果:随着羽扇豆醇浓度的升高,细胞增殖明显受到抑制,当羽扇豆醇浓度为300μmol/L时,抑制率达到100%;与对照组相比,药物组细胞凋亡率明显增加。结论:羽扇豆醇可显著抑制人髓系、淋系白血病细胞增殖并诱导其凋亡。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-11
引言  11-12
第一章 羽扇豆醇的不同给药剂量对黑色素瘤的抑制作用及其对免疫系统的影响  12-23
  1 材料与方法  13-15
    1.1 试剂和仪器  13
    1.2 实验动物  13-14
    1.3 羽扇豆醇溶剂配置  14
    1.4 黑素瘤B16 细胞培养  14
    1.5 小鼠肿瘤模型建立  14
    1.6 抗肿瘤治疗  14-15
    1.7 小鼠血细胞、脾细胞悬液的制备  15
    1.8 流式分析  15
  2 结果与分析  15-20
    2.1 药物毒性以及肿瘤抑制  15-17
    2.2 免疫系统激活状态  17-20
  3 讨论  20-21
  参考文献  21-23
第二章 羽扇豆醇对肿瘤的预防作用研究  23-32
  1 材料与方法  23-25
    1.1 试剂和仪器  23
    1.2 羽扇豆醇溶剂配置  23-24
    1.3 实验动物给药  24
    1.4 肿瘤接种  24
    1.5 小鼠血细胞、脾细胞悬液的制备  24-25
    1.6 流式分析  25
  2 结果与分析  25-29
    2.1 药物毒性  25
    2.2 肿瘤生长  25-27
    2.3 免疫系统  27-29
  3 讨论  29-30
  参考文献  30-32
第三章 羽扇豆醇对白血病细胞株增殖、凋亡作用的研究  32-38
  1 材料与方法  32-33
    1.1 材料  32
    1.2 细胞系及培养  32
    1.3 MTT 法测定细胞活力  32-33
    1.4 细胞凋亡检测  33
  2 结果  33-35
    2.1 细胞增殖实验  33-34
    2.2 凋亡实验结果  34-35
  3 讨论  35-36
  参考文献  36-38
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文  38-39
综述: 天然食物中的抗肿瘤成分——羽扇豆醇  39-53
  参考文献  48-53
致谢  53-54

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤治疗学
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