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榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株体外放射增敏作用的实验研究

作　者: 周兴芹
导　师: 季斌
学　校: 南通大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 榄香烯乳肺腺癌 A549细胞株凋亡放射增敏
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要

目的探讨榄香烯乳对人肺腺癌 A549细胞株体外放射增敏作用及其相关机制,为肺癌的放射增敏治疗提供新的思路和方法。方法（1）体外培养人肺腺癌A549细胞株,定期换液及传代,保持细胞生长良好。（2）四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。利用IC软件LOGIT法计算出榄香烯乳作用24h后,10%的细胞抑制浓度（IC10）。为避免药物自身毒性影响,实验采用24h的接近IC10的浓度研究放射增敏效应。（3）将各组细胞（空白对照组和加药联合照射组）置于不同照射剂量0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy X射线下照射,常规培养14d天后通过集落形成法观察榄香烯乳对A549细胞株的放射增敏作用,利用单击多靶数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,并计算平均致死量（D₀）、准阈剂量（Dq）等相关参数。（4）流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。（5）免疫细胞化学染色观察榄香烯乳作用24h后A549细胞的Bcl-2、Bax、Survivin及VEGF蛋白的表达变化。（6）数据采用SPSS 17.0统计软件包进行分析,采用单因素方差分析。结果（1）榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株增殖具有抑制作用。随作用浓度的增加,细胞的增殖抑制率升高,随作用时间的延长,细胞的增殖抑制率亦升高,即抑制率呈时间和剂量依赖性。IC软件LOGIT法计算出榄香烯乳作用24h后,IC10为43.49μg/ml。（2）榄香烯乳联合照射组细胞生存曲线左移,D₀减低,Dq变小,细胞的放射敏感性提高。（3）流式细胞术分析显示:榄香烯乳可以影响A549细胞株的周期分布,作用24h后,G₂/M期比例明显升高而抗拒射线的S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。（4）榄香烯乳作用于肺腺癌A549细胞株24h后,促进细胞凋亡的Bax蛋白表达增加,细胞质着色增强;抑制细胞凋亡的Bcl-2蛋白表达下降,细胞质着色减弱;增殖蛋白Survivin和VEGF的表达下降,且具有浓度相关性。结论（1）榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。（2）低浓度的榄香烯乳即具有一定的放射增敏作用。（3）榄香烯乳的增敏机制可能与榄香烯乳引起细胞G₂/M期阻滞及上调凋亡相关蛋白表达,诱导凋亡有关。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-10
第一章绪论  10-12
第二章材料和方法  12-17
  2.1 研究资料及仪器设备  12-13
  2.2 实验方法  13-17
第三章结果  17-27
  3.1 MTT法测定榄香烯乳对A549细胞的生长抑制  17-18
  3.2 采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化  18-19
  3.3 榄香烯乳作用后A549细胞的集落形成和存活率  19-21
  3.4 榄香烯乳作用后细胞周期与细胞凋亡结果  21
  3.5 榄香烯乳对凋亡相关蛋白的影响  21-27
第四章讨论  27-33
  4.1 肺癌治疗的临床和实验研究  27
  4.2 中药治疗和榄香烯乳的药理作用  27-28
  4.3 榄香烯乳对肺癌细胞株的影响  28-33
第五章结论  33-34
参考文献  34-37
英文缩略词  37-38
综述  38-49
  综述参考文献  45-49
攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目  49-50
致谢  50

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株体外放射增敏作用的实验研究

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