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草丁膦单克隆抗体的制备

作　者: 吴扬
导　师: 袁均林
学　校: 华中师范大学
专　业: 生化及分子生物学
关键词: 草丁膦单克隆抗体竞争性ELISA
分类号: S481.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 68次
引　用: 3次
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内容摘要

当今社会大量的化学农药应用于农业生产中，农药的残留对人类健康和生态环境形成巨大威胁。现在几乎所有的环境中，如土壤、植物、水体动物体内都能发现有农药残留，特别是对水环境和水生物的危害尤为严重。在各类化学农药中，有机磷农药污染所致危害较为常见，常有中毒事件发生，有机磷农药对于中毒者的肌肉，神经，脑，心脏及循环系统均有严重的损伤。草丁膦C₅H₁₅N₂OP₄ Ammonium-（3-amino-3-carboxy propyl）-methl phosplunate商品名为百试达（Basta）系巴斯夫公司所开发的有机磷除草剂，可防治禾本科和阔叶杂草。因能有效地控制杂草而被广泛使用。随着对草丁膦残留的毒性与环境风险的深入认识，为了生态环境安全和人类的健康，亟需开发更快捷和灵敏的检测手段。目前，大多数的农药残留检测都是使用色谱技术（比如气相色谱和液相色谱），但是由于这些传统技术费用昂贵、费时费力、不能同时检测大批量的样品，而免疫测定技术（ELISA）作为一种快速低廉的检测方法在过去十几年中发展迅速，与色谱技术一起成为了农药残留量检测的支柱技术。农药免疫分析的关键就是要制备高特异性的抗体，以提高检测的特异性和灵敏性。杂交瘤单克隆抗体技术的问世为其提供了可能性，国外已制备多种农药单克隆抗体（Monoclone antibodies，McAb）并应用于农药残留的免疫分析。近年国内应用单克隆抗体于农药残留检测也有一定的发展，但国内外尚未发现酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测草丁膦残留的相关研究。本文研究了草丁膦半抗原的合成与鉴定以及半抗原与载体蛋白质的偶联与鉴定，并制备出了高效价的抗草丁膦单克隆抗体。旨在为进一步建立草丁膦的ELISA分析方法并应用于农药残留分析。由于草丁膦的分子量不足1000，不能引起免疫反应，所以我们采用交联剂将草丁膦连接到鸡卵清白蛋白（OVA）上，采用皮下多点注射免疫小鼠，结果获得了高效价的多克隆抗体。制备及鉴定了高特异性的草丁膦单克隆抗体并对草丁膦进行检测。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-8
一、文献综述  8-13
  1. 抗体的生产及应用  8-9
    1.1 新的抗体制备方法  8
    1.2 新型抗体的运用  8-9
  2. 免疫技术与现代理化分析手段结合  9-11
  3. 免疫测定技术在农药残留分析上的应用  11-12
  4. 本研究的目的和意义  12
  5. 论文特点及创新  12-13
二、材料与方法  13-24
  1. 实验材料  13-15
    1.1 动物  13
    1.2 细胞  13
    1.3 主要化学试剂  13
    1.4 主要实验仪器  13
    1.5 主要实验溶液的配制  13-15
  2. 实验方法  15-24
    2.1 草丁膦免疫原和包被抗原的制备和检测  15-16
    2.2 单克隆抗体的制备  16-21
    2.3 单克隆抗体的鉴定  21-22
    2.4 草丁膦 ELISA 检测方法的建立  22-24
三、实验结果  24-30
  1. 免疫原和包被抗原的鉴定  24-26
    1.1 抗原中蛋白的含量  24
    1.2 抗原中磷的含量  24-25
    1.3 抗原中载体蛋白与草丁膦的摩尔比  25
    1.4 合成抗原紫外吸收光谱扫描  25
    1.5 合成抗原中 ~(31)P 进行核磁扫描  25-26
  2. 最适包被浓度的测定  26
  3. 血清效价的测定  26
  4. 草丁膦抗体杂交瘤细胞株的筛选及克隆  26-27
  5. 单克隆抗体的鉴定  27-28
    5.1 草丁膦单克隆抗体与类似物交叉反应  27
    5.2 SDS-PAGE 凝胶电泳分析  27-28
  6. 草丁膦的竞争性 ELISA 检测方法  28-30
四、结论  30-31
五、参考文献  31-36
附录一  36-38
附录二  38-39
致谢  39

草丁膦单克隆抗体的制备

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