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鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选

作　者: 米拉古丽·加尔恒
导　师: 赵宗胜
学　校: 石河子大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 鸡鹌鹑属间杂交种 SSH 肌肉发育
分类号: S839
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

脊椎动物肌纤维类型和数量主要由遗传因素决定,肌肉组织中的肌纤维在胚胎期已经形成了,出生后其肌纤维数不再改变,肌肉生长主要依赖肌卫星细胞的增殖分化导致的肌纤维长度增加和周径增大,而非细胞的增生或肌细胞数目的增多。即肌肉的早期发育是动物的产肉潜力及肌肉品质的关键,其发育状况直接决定动物的肉产量和质量。家鸡是研究肌肉发育调控过程中非常好的动物模型,蛋鸡和肉鸡在骨骼肌生长速率上存在显著差异。鸡与鹌鹑属间杂交,其属间杂交种具有双亲的肉品质特点,且基因及相关性状发生分离和重新组合的现象,适合作为肉品质研究的一种生物学模式生物。本研究分别选用肉用种公鸡和蛋用种公鸡当做父本,朝鲜鹌鹁当做母本进行鸡与鹌鹑属间杂交,通过人工受精、孵化、采样等一系列过程,共收集获得了19个13日龄肉用型属间杂交种胚胎肌肉组织和21个13日龄蛋用型属间杂交种胚胎肌肉组织用于抑制性消减杂交实验,其可以明确揭示肌肉发育基本规律。以肉用型公鸡当做父本,鹌鹑当做母本的鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织和蛋用型公鸡当做父本,鹌鹑当做母本的鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织为实验组和对照组,利用抑制性消减杂交技术,进行了正向抑制性消减杂交,成功构建了肌肉发育相关的消减文库。蓝白斑实验获得180个克隆菌落,利用Nested Primer 2R和Nested Primer 1为引物对每个克隆进行了PCR检测,筛选重组克隆并鉴定插入片段的大小弃阴性克隆和PCR产物为多条带的克隆,最后从消减cDNA质粒文库中筛选到140个有效阳性克隆,插入片段大小主要分布于250-750bp之间,随机选择100个阳性克隆送测序。从中选择40个测序结果进行同源性分析,判断其中4个序列分别与鸡Y-BOX结合蛋白,鸡FK506结合蛋白3,鸡波形蛋白和鸡骨骼肌肌钙蛋白T有高度同源性。其余克隆序列中,24个序列和目前已报道的EST序列存在高度同源性,可能为新基因；4个序列测序结果和已报道基因及EST文库序列均不具有较高的同源性,这部分结果有待于进一步研究去验证。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
本文缩写的中英文对照  7-8
目录  8-9
引言  9-11
第一章文献综述  11-19
  1 鸡与鹌鹑远缘杂交研究进展  11-12
  2 肌肉发生机制的研究进展  12-16
    2.1 胚胎肌肉发育  13-14
    2.2 肌肉发育相关基因及其作用  14-16
      2.2.1 肌肉调节因子(MRFs)在肌肉发育中的功能  14-15
      2.2.2 Pax基因  15
      2.2.3 成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor Fgf)  15-16
  3 抑制性消减杂交的研究进展  16-19
第二章鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选  19-45
  1 实验材料与方法  19-32
    1.1 实验材料  19-20
    1.2 实验方法  20-32
  2 结果与分析  32-41
    2.1 蛋用属间杂交种胚胎和肉用属间杂交种胚胎的总RNA提取  32-33
    2.2 mRNA的完整性和均一性  33
    2.3 Driver和Tester cDNA的制备  33-34
    2.4 两轮PCR对消减杂交产物的特异性扩增结果  34-35
    2.5 消减杂交、抑制性PCR和消减效率检测  35-36
    2.6 差异表达基因消减cDNA文库的构建结果  36
    2.7 测序结果  36-38
    2.8 同源性分析结果  38-41
  3 讨论  41-43
  4 结论  43-44
  5 创新点  44
  6 展望  44-45
参考文献  45-51
附录  51-55
作者简介  55
发表论文情况  55-56
致谢  56-57
导师评阅表  57

鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选

内容摘要

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