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给药时间对联合化疗副作用的影响

作　者: 袁哲
导　师: 徐峰
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药理学
关键词: 环磷酰胺顺铂抗癌药时辰化疗毒副作用生物节律 p53 bcl-2 细胞周期彗星实验
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

研究背景：我们生活的世界是一个在不停变化的世界。这些变化多数是有规律的周期性变化。这种节律性变化不但存在于人及动物体内，同时也存在于正常以及人和动物的肿瘤细胞内。因此充分了解正常及肿瘤组织的节律差异，将会使我们更合理的选择用药时间，以达到提高药物对肿瘤细胞的选择性，同时减少对正常组织细胞的杀伤作用。环磷酰胺、顺铂是临床常用的非选择性烷化剂。两药因具有抗瘤谱广、作用强的特点常联合用于多种癌症的治疗。但因其选择性差，常常导致严重的副作用，如骨髓抑制、肾脏毒性及消化道反应。在治疗的同时也给患者在身体上、精神上带来了极大的痛苦。目的：本研究旨在探索两药合用的最佳给药时间，以期为临床癌症化疗提供必要的理论依据。方法：1．小鼠按昼夜六个不同时间点（10、14、18、22、02、06h）分别给予环磷酰胺(20mg·kg^-1)和顺铂(2mg·kg^-1)，以抑瘤率、外周血象、体重及血清BUN含量为指标，考察环磷酰胺、顺铂单独用药药效及毒性反应的昼夜节律变化。2．小鼠按昼夜六个不同时间点（10、14、18、22、02、06h）给予环磷酰胺(20-40mg·kg^-1)，各给药组统一在每日18h给予顺铂(2mg·kg^-1)一次进行联合化疗，以考察两药联合化疗不同时间给予环磷酰胺毒性反应的时间依赖性。以外周血细胞计数、紫外分光光度法及生化方法考察骨髓抑制及肾脏损伤的时间依赖性；采用流氏细胞术分别考察了小鼠S₁₈₀肿瘤细胞、正常及化疗后小鼠骨髓细胞周期的昼夜节律变化；运用Western blotting方法测定正常及化疗小鼠骨髓细胞凋亡相关蛋白p53、bcl-2蛋白表达的昼夜节律；单细胞凝胶电泳技术考察不同时间用药对外周血淋巴细胞DNA损伤的情况。3．小鼠按昼夜六个不同时间点给予顺铂(2mg·kg^-1)，各给药组统一在每日18h给予环磷酰胺(20mg·kg^-1)进行联合化疗，以考察两药联合化疗不同时间给予顺铂毒性反应的时间依赖性。小鼠的死亡率、血象的改变、骨髓DNA含量及肾脏损伤等毒性反应的时间依赖性。结果：1．环磷酰胺、顺铂单独用药均为18：00给药副作用最小。2．两药联合化疗环磷酰胺10h给药小鼠的死亡率，体重下降的百分率及对外周血象、骨髓DNA含量的抑制作用均最大，18h给药抑制作用最小；小鼠S₁₈₀肿瘤细胞DNA合成高峰期在6-10h，低谷期在14h、2h。正常小鼠骨髓细胞DNA合成高峰期在10：00h，低谷期在02h；化疗后DNA合成的高峰期在02h，谷值在18：00h。其中10：00h给药对S期的抑制作用最大减少了38％；正常小鼠骨髓细胞p53、bcl-2蛋白表达均在18：00h最强，22：00h最弱。化疗后P53蛋白在22：00h

全文目录

中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
第一章前言  13-16
  1.癌症的化疗  13-14
  2.时辰化疗  14-15
  3.立题依据  15-16
第二章实验材料  16-18
  1.实验药品与试剂  16-17
  2.实验动物  17
  3.实验装置与仪器  17-18
第三章实验方法  18-26
  一.环磷酰胺、顺铂单独用药抑瘤及副作用的时间依赖性研究  18-19
    1.环磷酰胺不同时间用药的抑瘤及副作用研究  18
    2.顺铂不同时间用药的抑瘤及副作用研究  18-19
      2.1 顺铂不同时间用药对抑瘤及肾脏毒性的影响  18-19
      2.2 顺铂不同时间用药的LD_(50)  19
  二.环磷酰胺、顺铂联合用药环磷酰胺毒副作用的时间依赖性研究  19-25
    1.药效及一般毒性考察  19-20
      1.1 环磷酰胺不同时间用药对抑瘤作用的影响  19
      1.2 环磷酰胺不同时间用药对小鼠体重及死亡率的影响  19
      1.3 环磷酰胺不同时间用药对小鼠骨髓抑制及肾脏毒性的影响  19-20
    2.细胞周期测定  20-21
      2.1 小鼠S_(180)肉瘤细胞周期的昼夜节律研究  20
      2.2 不同时间联合化疗对肿瘤细胞周期的影响  20
      2.3 健康小鼠骨髓细胞周期的昼夜节律研究  20
      2.4 不同时间联合化疗对小鼠骨髓细胞周期的影响  20-21
    3.蛋白免疫印迹实验  21-24
      3.1 健康小鼠骨髓细胞P53、bcl-2蛋白表达的昼夜节律研究  21
      3.2 不同时间联合化疗对小鼠骨髓P53、bcl-2蛋白表达的影响  21
      3.3溶液配制  21-22
      3.4组织总蛋白的提取  22
      3.5 SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及染色  22
      3.6电转印(半干式转印)  22-23
      3.7封闭及杂交  23
      3.8显色  23
      3.9 蛋白质浓度的测定(考马斯亮蓝G-250法)  23-24
    4.彗星试验  24-25
      4.1 环磷酰胺不同时间用药对淋巴细胞DNA的损伤情况研究  24-25
  三.环磷酰胺、顺铂联合用药顺铂毒副作用的时间依赖性研究  25
    1.顺铂不同时间用药对小鼠死亡率的影响  25
    2.顺铂不同时间用药对小鼠骨髓抑制及肾脏毒性的影响  25
  四.数据处理  25-26
第四章实验结果  26-56
  一.环磷酰胺、顺铂单独用药抑瘤及副作用的时间依赖性研究  26-32
    1.环磷酰胺抑瘤及副作用的时间依赖性研究  26-29
      1.1 环磷酰胺不同时间用药对抑瘤作用的影响  26
      1.2 环磷酰胺不同时间用药对小鼠体重的影响  26-27
      1.3 环磷酰胺不同时间用药对小鼠外周血象的影响  27-29
    2.顺铂抑瘤及副作用的时间依赖性研究  29-32
      2.1 顺铂不同时间用药对抑瘤作用的影响  29
      2.2 顺铂不同时间用药对小鼠体重的影响  29
      2.3 顺铂不同时间用药对小鼠肾脏毒性的影响  29
      2.4 顺铂不同时间用药的LD_(50)  29-32
  二.环磷酰胺、顺铂联合用药环磷酰胺毒副作用的时间依赖性研究  32-52
    1.药效及一般毒性考察  32-37
      1.1 环磷酰胺不同时间给药对抑瘤作用的影响  32
      1.2 环磷酰胺不同时间给药对小鼠体重的影响  32-33
      1.3 环磷酰胺不同时间给药对小鼠死亡率的影响  33
      1.4 环磷酰胺不同时间给药对小鼠骨髓抑制的影响  33-35
        1.4.1 不同时间给药对WBC的影响  33-34
        1.4.2 不同时间给药对PLT、RBC、Hb的影响  34
        1.4.3 不同时间给药对骨髓DNA含量的影响  34-35
      1.5 环磷酰胺不同时间给药对小鼠肾脏毒性的影响  35-37
    2.细胞周期测定  37-47
      2.1 小鼠S_(180)肉瘤细胞周期的昼夜节律研究  37-42
      2.2 联合化疗不同时间给药对小鼠S_(180)肿瘤细胞周期的影响  42-43
      2.3 正常及不同时间联合化疗对小鼠骨髓细胞周期昼夜节律的影响  43-47
    3.蛋白免疫印记实验  47-50
      3.1 正常小鼠骨髓细胞凋亡相关蛋白P53、Bcl-2表达昼夜节律  47-48
      3.2 不同时间联合化疗对小鼠骨髓细胞P53、Bcl-2蛋白表达节律的影响  48-50
    4.彗星实验  50-52
      4.1 环磷酰胺不同时间给药对小鼠外周淋巴细胞DNA损伤的影响  50-52
  三、环磷酰胺、顺铂联合应用顺铂的时间依赖性毒性研究  52-56
    1.顺铂不同时间给药对小鼠死亡率的影响  52-53
    2.顺铂不同时间给药对WBC的影响  53
    3.顺铂不同时间给药对小鼠骨髓DNA含量的影响  53-54
    4.顺铂不同时间用药对小鼠肾脏损伤的影响  54-56
第五章讨论  56-64
第五章结论  64-65
参考文献  65-68
符号说明  68-69
致谢  69

给药时间对联合化疗副作用的影响

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