学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

KZNF家族中p53调控分子的筛选及功能鉴定（AxZ型、SABZ型和ACxZ型）

作　者: 姚菲
导　师: 范礼斌；张令强
学　校: 安徽医科大学
专　业: 遗传学
关键词: KZNF家族 Apak p53选择性调控 KRAB结构域
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 2次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


抑癌蛋白P53是目前已知与人类肿瘤发生发展最为密切相关的分子之一,也是控制细胞增殖、凋亡的蛋白网络的节点分子。p53作为重要的一种转录因子,在感应不同类型的细胞应激时,如DNA损伤、细胞异常增殖和原癌基因激活等,其活性迅速增强,并选择性调控其下游与细胞周期阻滞、细胞凋亡或DNA损伤修复相关的靶基因的表达,从而诱导细胞周期阻滞和/或细胞凋亡的发生。近年来,p53的选择性调控方面越来越受关注,如对Hzf、hCAS/CSE1L、TP53INP1和ASPP家族成员等多种p53选择性调控分子进行了鉴定和功能研究,这对阐明p53在维持细胞的正常生长和防止癌变等方面的精确调节作用有着重要的意义。含有KRAB(Kruppel-associated box)结构域的锌指蛋白(KZNF)是人类基因组中最大的转录调控因子家族,KZNF通过与其转录抑制辅因子KAP-1(KRAB box-associated protein-1)及其它转录因子结合,发挥特异的转录抑制功能。本实验室的前期研究鉴定了一种p53负调控分子Apak明确了其选择性下调p53凋亡相关的靶基因表达的调控机制。Apak(ATM and p53 associated KZNF protein)是KZNF家族中的一员,它能够选择性下调凋亡相关的p53靶基因表达,抑制p53介导的细胞凋亡,而对细胞周期阻滞、细胞新陈代谢等及其它p53参与的生理功能没有调控作用。前期结果揭示了KZNF家族成员Apak在p53选择性调控中有着重要的作用。KZNF家族成员的数量多达400多个,是仅存于四足脊椎动物中的一个转录调控因子家族,其家族成员的结构特征是N端含有保守的KRAB结构域,中部及C端含有数目不等的C2H2型锌指结构,KZNF的KRAB结构域介导蛋白质-蛋白质相互作用,具有较强的转录抑制功能。根据KRAB的类型不同,可将所筛到的KZNF家族成员分为七类,分别为KRAB-A,KRAB-AB,KRAB-AC,KRAB-SAB,KRAB-ABL,KRAB-SA,KRAB-S,其中,KRAB-A,KRAB-AB,KRAB-SAB成员较多。我们感兴趣的是,除了Apak外,KZNF家族中还有多少成员可具有类似Apak的角色,参与p53的调控,各成员间的协同关系又是怎样的,这些也正是本课题拟探讨的科学问题。本论文立足于前期研究的基础上,首先继续完成筛选出的含有ATM底物磷酸化位点SQ/TQ模序的48个成员质粒的构建,并进而成功构建了其中的7个分子的真核细胞表达质粒,目前在前期准备的基础上,除了ABxZ型外,含有AxZ型、SABZ型和ACxZ型的KZNFs需构建的质粒共有17个;然后利用报告基因活性分析体系检测了构建成功的16个KZNFs分子对p53转录活性的调控,筛选出7个成员(即ZNF205、ZNF475、ZNF420、ZNF589、ZNF498、ZNF417、ZNF202)对p53的转录因子活性具有较强的下调作用。有趣的是,还发现一个成员ZNF136对p53的转录因子活性具有较强的上调功能,我们接着通过western blot的方法检测KZNFs分子对p53及其下游靶基因的蛋白表达水平的影响,初步探讨了p53选择性调控的方向。在检测的4个分子中,ZNF205、ZNF597能选择性下调p53介导的细胞凋亡靶基因的蛋白水平;而ZNF475、ZNF498能选择性下调p53介导的细胞代谢靶基因的蛋白水平。此外,确定了能显著抑制p53转录活性的KZNFs与p53的结合关系,结果表明,在检测的5个成员中4个均可以和p53相互作用。综上所述,本论文在前期研究基础上,进一步研究了KZNF家族在重要抑癌蛋白P53复杂调控网络中的可能作用,序列分析搜索到了全部48个作为候选ATM底物的KZNF成员,成功克隆了17个KZNFs分子中(除了ABxZ型外)的16个成员,筛选出多个对p53活性具有抑制功能的分子,从而进一步证实KZNF家族确实存在更多的p53调控蛋白。本研究对加深认识和理解KZNF家族的生理功能具有潜在的原创性价值,有助于解释p53调控的时空复杂性,并为靶向p53及其调控分子的肿瘤治疗提供了更多的科学线索。

全文目录


摘要  5-7Abstract  7-9英文缩写词  9-10前言  10-15第一章 KZNFs 成员真核载体构建  15-24  1 材料与方法  15-19  2.结果  19-23  3 小结  23-24第二章 KZNFs 对 p53 转录活性的调控  24-30  1 材料与方法  24-25  2 结果  25-28  小结  28-30第三章 KZNFs 抑制 p53 作用的确证及其机制的探讨  30-36  1 材料与方法  30-32  2.结果  32-35  小结  35-36第四章 KZNFs 和 p53 相互作用成员的筛选  36-39  1 材料与方法  36-38  2 结果  38-39  小结  39第五章 药物处理下 KZNFs 对 p53 转录活性的影响  39-42  1 材料与方法  39  2 结果  39-41  3 小结  41-42结果  42-45讨论  45-50参考文献  50-54附录  54-59致谢  59-61综述  61-72  参考文献  70-72

相似论文

  1. 非编码基因MALAT1调控结直肠癌转移的机制研究,R735.3
  2. KRAB型锌指蛋白家族中p53调控分子的筛选及功能研究,Q75
  3. 心肌缺血预适应上调新基因Mipu1的结构与功能研究,R363
  4. Slug对P53-MDM2系统的调控作用,R730.2
  5. 螺旋断层加速器MVCT影像质量分析及剂量重算的研究,R730.5
  6. TRAIL对肿瘤侵润CD4~+CD25~+ Treg的调节作用,R730.2
  7. 平阳霉素胸膜固定术对恶性胸腔积液中凝血—抗凝活性的影响,R730.5
  8. 约氏疟原虫CSP抑制肿瘤细胞增殖和存活及其机制研究,R730.5
  9. 胰高血糖素样肽-2对大鼠阿霉素化疗的肠屏障的保护作用,R730.5
  10. rBTI-2的表达及其抗肿瘤活性研究,R730.2
  11. α1，3岩藻糖基转移酶Ⅳ（Fut4）表达上调增加鳞状癌细胞scc12转移潜能,R730.2
  12. 岩藻糖基转移酶Ⅶ的表达促进A431细胞增殖,R730.2
  13. 自体CIK细胞过继免疫治疗恶性实体瘤的临床研究,R730.5
  14. 沉默Bmi-1表达对A549细胞增殖和侵袭转移的作用,R730.2
  15. 香菇C91-3发酵液蛋白分离纯化初步鉴定及其抗肿瘤机制的研究,R730.5
  16. 环境致癌物苯并芘灭活PTEN的机制研究,R730.2
  17. 羽扇豆醇用于肿瘤治疗的给药剂量与方案研究及其对小鼠免疫系统的影响,R730.5
  18. 生物可降解聚合物纳米药物载体用于癌症的靶向联合治疗,R730.5
  19. 髓母细胞瘤差异表达microRNA的筛选及功能预测,R730.2
  20. 携带hIL12-p40-L△p35的双靶向溶瘤腺病毒联合CIK细胞的抗癌作用研究,R730.5

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
© 2012 www.xueweilunwen.com