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杨桃植物培养体系生物转化青蒿酸和二氢去氧青蒿素B的研究

作　者: 杨丽
导　师: 于荣敏
学　校: 暨南大学
专　业: 中药学
关键词: 杨桃悬浮培养细胞 生物转化 青蒿酸 二氢去氧青蒿素B 羟基化 糖基化
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本文利用杨桃植物培养体系分别对青蒿酸(1)和二氢去氧青蒿素B(5)进行了生物转化研究。本研究首次使用杨桃悬浮培养细胞进行生物转化研究,以青蒿素的生物合成途径中两个重要中间体青蒿酸和二氢青蒿酸为底物,成功对青蒿酸(1)和二氢去氧青蒿素B(5)进行了生物转化。通过化学提取和色谱柱层析分离等手段分离纯化得到了五个青蒿酸和二氢去氧青蒿素B的衍生物。青蒿酸作为底物与杨桃悬浮培养细胞共培养两天,分离并鉴定三个转化产物：3-β-羟基青蒿酸(2)、青蒿酸3-β-O-β-D-葡萄糖(3)及3-β-羟基青蒿酸-β-D-葡萄糖酯(4)；3-β-羟基青蒿酸(2)的转化率在共培养的第1 d达到最大值(48.67%),青蒿酸3-β-O-β-D-葡萄糖(3)在共培养的第2 d达到最大值(31.24%),3-β-羟基青蒿酸-β-D-葡萄糖酯(4)在共培养的第6 d达到最大值(7.03%)。二氢去氧青蒿素B作为底物与杨桃悬浮培养细胞共培养一天,分离并鉴定两个转化产物：7α-羟基二氢去氧青蒿素B(6)和3α-羟基二氢去氧青蒿素B(7)；7α-羟基二氢去氧青蒿素B(6)和3α-羟基二氢去氧青蒿素B(7)的转化率都在共培养的第1 d达到最大值(29.02%,23.26%)。此外,考察了不同碳源及外源因子双氧水和水杨酸对生物转化的影响,结果发现葡萄糖较适宜做为碳源,双氧水和水杨酸则不利于转化产物的生成。转化产物对肿瘤细胞系K562和HeLa的抑制增殖实验结果发现：转化产物(4)、(6)和(7)对肿瘤细胞增殖具有抑制作用。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-8
第一章 前言  8-23
  1.1 生物转化的研究概述  8-20
    1.1.1 生物转化系统类型  8-12
    1.1.2 生物转化主要的反应类型  12-15
    1.1.3 影响植物细胞培养体系生物转化的因素  15-17
    1.1.4 生物转化的应用  17-20
  1.2 青蒿酸和二氢去氧青蒿素B的研究概况  20-21
    1.2.1 青蒿酸的研究概况  20-21
    1.2.2 二氢去氧青蒿素B的研究概况  21
  1.3 杨桃愈伤组织的研究概况  21-22
  1.4 立题依据  22-23
第二章 杨桃悬浮培养细胞生物转化青蒿酸的研究  23-33
  2.1 仪器和试剂  23-24
    2.1.1 仪器  23
    2.1.2 试剂  23-24
  2.2 材料和方法  24-27
    2.2.1 杨桃悬浮培养体系的建立  24
    2.2.2 底物的加入  24
    2.2.3 产物的TLC检测  24
    2.2.4 产物的HPLC检测  24-25
    2.2.5 产物的分离纯化  25
    2.2.6 HPLC法测定杨桃悬浮培养体系中产物的含量  25
    2.2.7 样品的测定  25-26
    2.2.8 转化产物生物合成条件的优化  26
    2.2.9 产物体外抗肿瘤活性研究  26-27
  2.3 结果与分析  27-31
    2.3.1 产物的检测  27-28
    2.3.2 结构鉴定  28-30
    2.3.3 产物生物合成条件的优化  30-31
    2.3.4 活性分析  31
  2.4 结论  31-33
第三章 杨桃悬浮培养细胞生物转化二氢去氧青蒿素B的研究  33-42
  3.1 仪器和试剂  33-34
    3.1.1 仪器  33
    3.1.2 试剂  33-34
  3.2 材料和方法  34-37
    3.2.1 杨桃悬浮培养体系的建立  34
    3.2.2 底物的加入  34
    3.2.3 产物的TLC检测  34
    3.2.4 产物的HPLC检测  34-35
    3.2.5 产物的分离纯化  35
    3.2.6 HPLC法测定杨桃悬浮培养体系中产物的含量  35-36
    3.2.7 样品的测定  36
    3.2.8 转化产物生物合成条件的优化  36
    3.2.9 产物体外抗肿瘤活性研究  36-37
  3.3 结果与分析  37-40
    2.3.1 产物的检测  37-38
    3.3.2 结构鉴定  38-39
    3.3.3 产物生物合成条件的优化  39
    3.3.4 活性分析  39-40
  3.4 结论  40-42
第四章 结论和讨论  42-45
  4.1 结论  42
  4.2 讨论  42-45
参考文献  45-51
附录  51-61
  附录1  51-52
  附录2  52-53
  附录3  53-60
  附录4  60-61
致谢  61

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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