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两种植物培养体系生物转化青蒿酸和二氢青蒿酸的研究

作 者: 胡艳山
导 师: 于荣敏
学 校: 暨南大学
专 业: 药物化学
关键词: 青蒿酸 二氢青蒿酸 3α-羟基青蒿酸 三尖杉 生物转化 15-羟基二氢青蒿酸 15-羟基-二氢青蒿酸-β-D-葡萄糖酯
分类号: R284
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 111次
引 用: 2次
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内容摘要


目的:利用三尖杉和转基因西洋参冠瘿组织培养体系对青蒿素的生物合成中间体青蒿酸二氢青蒿酸进行生物转化研究,获得三个青蒿酸及二氢青蒿酸衍生物,同时得到一个次级代谢产物。方法:通过TLC和HPLC方法检测转化体系中的转化产物;利用硅胶柱层析、制备薄层、Sephadex LH20、ODS柱等方法分离纯化转化产物;检验产物的理化性质;用1H-NMR,13C-NMR和MS方法鉴定转化产物结构;用HPLC方法考察转化体系对底物进行生物转化的最佳共培养条件。结果:国内首次使用三尖杉悬浮培养细胞进行生物转化研究,以青蒿素的生物合成途径中两个重要中间体青蒿酸和二氢青蒿酸为底物。青蒿酸作为底物与三尖杉悬浮培养细胞共培养两天,从三尖杉体系分离并鉴定一个产物3α-羟基青蒿酸(SQJ-2),最佳共培养时间为2d,总的摩尔转化率最高为8.42%。共培养时间也为两天,从体系中分离并鉴定两个转化产物分别为:15-羟基二氢青蒿酸(SQQJ-3)、15-羟基二氢青蒿酸-β-D-葡萄糖酯(SQQJ-5);培养体系中SQQJ-3的转化率在共培养的第2d达到最大值(6.02%),SQQJ-5在共培养的第3d达到最大值(4.95%)。使用转基因西洋参冠瘿组织对青蒿酸进行转化得到一个次级代谢产物:12,13-环氧-11-羟基-9-十八碳烯酸。

全文目录


中文摘要  4-5
英文摘要  5-9
目录  9
第一章 前言  9-24
  1.1 生物转化的研究概况  9-14
    1.1.1 生物转化中的主要反应类型  10
    1.1.2 羟基化反应  10-11
    1.1.3 糖基化反应  11
    1.1.4 醇酮的氧化还原反应  11-12
    1.1.5 C=C双键的还原反应  12
    1.1.6 硝基还原反应  12-13
    1.1.7 环氧化反应  13
    1.1.8 酯化反应和水解反应  13-14
    1.1.9 成环反应  14
  1.2 生物转化在天然产物化学中的应用  14-18
    1.2.1 有机合成及天然产物结构修饰  14-15
    1.2.2 手性药物合成和拆分  15-17
    1.2.3 作为药物代谢机制的研究模型  17-18
    1.2.4 阐明抑真菌药物的耐药机制  18
  1.3 青蒿酸的研究概况  18-21
    1.3.1 青蒿酸的理化性质  18
    1.3.2 青蒿酸作为合成原料的应用  18-19
    1.3.3 青蒿酸作为底物进行生物转化研究  19-20
    1.3.4 青蒿素生物合成途径中的重要中间体  20-21
    1.3.5 青蒿酸的药理作用  21
  1.4 二氢青蒿酸简介  21-22
  1.5 三尖杉愈伤组织的研究概况  22-23
  1.6 冠瘿组织培养物转化体系  23
  1.7 立题依据  23-24
第二章 三尖杉悬浮培养细胞生物转化青蒿酸的研究  24-30
  2.1 实验仪器  24
  2.2 实验试剂  24-25
  2.3 实验材料与方法  25-27
    2.3.1 材料  25
    2.3.2 培养体系  25
    2.3.3 三尖杉悬浮培养细胞的建立  25
    2.3.4 生物转化方法  25
    2.3.5 转化产物的检测  25-26
    2.3.6 转化产物的分离纯化  26
    2.3.7 共培养时间对产物产率的影响  26
    2.3.8 标准曲线的绘制  26-27
  2.4 结果与分析  27-29
    2.4.1 转化产物的HPLC的检测  27
    2.4.2 产物的结构鉴定  27-28
    2.4.3 转化产物的时效(T-C)曲线  28-29
  2.5 讨论  29-30
第三章 三尖杉悬浮培养细胞生物转化二氢青蒿酸的研究  30-39
  3 实验仪器及试剂  30-39
    3.1 实验仪器  30
    3.2 实验试剂  30-31
    3.3 实验材料与方法  31-34
      3.3.1 材料  31
      3.3.2 培养体系  31
      3.3.3 三尖杉悬浮培养细胞的建立  31
      3.3.4 生物转化方法  31
      3.3.5 转化产物的检测  31-32
      3.3.6 转化产物的分离纯化  32
      3.3.7 共培养时间对产物产率的影响  32
      3.3.8 标准曲线的绘制  32-33
      3.3.9 转化产物的波谱数据  33-34
    3.4 结果与分析  34-37
      3.4.1 转化产物的HPLC的检测  34-35
      3.4.2 产物的结构鉴定  35-36
      3.4.3 转化产物的时效(T-C)曲线  36-37
    3.5 讨论  37-39
第四章 转基因西洋参冠瘿组织对青蒿酸的生物转化研究  39-42
  4.1 实验仪器  39
  4.2 实验试剂  39
  4.3 实验材料与方法  39-40
    4.3.1 实验材料  39
    4.3.2 培养基的配制  39
    4.3.3 培养体系预培养  39
    4.3.4 预实验  39-40
    4.3.5 转化产物的分离纯化  40
  4.4 实验结果  40-41
    4.4.1 检测结果  40
    4.4.2 转化产物的波谱数据  40-41
    4.4.3 转化产物GQS-2的结构鉴定  41
  4.5 讨论  41-42
第五章 结论和讨论  42-44
  5.1 结论  42
  5.2 讨论  42-44
参考文献  44-50
附录  50-63
  附录1  50-51
  附录2  51-62
  附录3  62-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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