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中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究

作　者: 钟丽敏
导　师: 嵇富海
学　校: 苏州大学
专　业: 麻醉学
关键词: 星形胶质细胞 M受体毒蕈碱阿托品脂多糖
分类号: R614
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的通过研究中枢M受体对内毒素血症大鼠脑内星形胶质细胞增殖、活化的影响及对内毒素血症大鼠外周、脑内炎症因子水平的影响,进而探讨脑内M型胆碱能受体与外周、中枢炎症反应的关系和可能机制。方法实验分为二部分1.侧脑室注入M受体激动剂/拮抗剂对内毒素血症大鼠脑内星形胶质细胞表达的影响雄性SD大鼠24只随机分为4组:空白组(N组,n=6),分别于外周静脉和侧脑室注射生理盐水;对照组(C组,n=6),外周静脉注射LPS,侧脑室注入生理盐水;拮抗剂组(A组,n=6):外周注射LPS,侧脑室注入M受体拮抗剂阿托品;激动剂组(M组,n=6),外周注射LPS,侧脑室注入M受体激动剂毒蕈碱。于建模前1h侧脑室干预给药或生理盐水,建模后4h取大鼠大脑,采用免疫组化法测定海马CA1区星形胶质细胞的表达变化。2.侧脑室注入M受体激动剂/拮抗剂对内毒素血症大鼠脑内及外周炎症因子分泌的影响分组同第一部分,各组大鼠于建模前1h侧脑室干预给药或生理盐水,建模后4h于腹主动脉取血约5ml,离心后取上清,采用ELISA法检测TNF-α及IL-6的表达。取血同时,断头取两侧海马,组织匀浆后取上清,先行BCA蛋白定量,再用ELISA法检测海马组织TNF-α及IL-6的表达。结果1.免疫组化结果N组大鼠海马星形胶质细胞标志物(GFAP)有少量表达,但染色浅,胞体小,分支少而细长;C组大鼠海马GFAP染色加深,胞体肥大,分支增多变粗;M组能有效抑制LPS诱导的星形胶质细胞的活化;A组则没有这种效应。图像分析显示,与N组相比,其他各组大鼠海马GFAP阳性细胞数及平均光密度值显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);与C组相比,M组大鼠海马GFAP阳性细胞数及平均光密度值显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。A组与C组相比差异无统计学意义(P>0.05)。2.脑组织及外周血ELISA结果C组与N组相比,脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达明显增加,差异显著(P<0.05);M组与C组比较,脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达显著减少,两者比较有统计学差异(P<0.05);A组与C组相比,脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达无明显变化(P>0.05)。结论1. LPS可激活星形胶质细胞,使其GFAP表达增加,侧脑室内注射M受体激动剂毒蕈碱能够有效抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,表现为GFAP阳性细胞数及平均光密度值的显著减少。而侧脑室注射M受体拮抗剂阿托品则没有此效应。2. LPS可诱导脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达增加,侧脑室注射M受体激动剂毒蕈碱可以有效抑制由LPS介导的脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达,而侧脑室注射M受体拮抗剂阿托品则没有此效应。

中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究

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