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EAN脑保护与脑损伤修复三细胞模型系统中的星形胶质细胞形态特征

作　者: 吴微
导　师: 孙长凯
学　校: 大连医科大学
专　业: 生理学
关键词: 大鼠星形胶质细胞 GFAP 原代培养共聚焦显微镜 Transwell
分类号: R651.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:关于脑保护和脑损伤修复研究中,一般采用在体动物实验和体外细胞培养两种。在体实验虽然能保证与人体内环境的高度相似性,但由于其环境复杂,不可控因素较多,无法进行对单一干扰因素的分析。而单一的细胞培养忽略了脑内不同细胞(脑毛细血管内皮细胞、星形胶质细胞及神经元)之间的相互作用,因此共培养技术应运而生。但大多采用细胞系或来自不同种属动物的原代培养细胞共培养,已有文献指出这两种方式存在着许多不可避免的差异,这些差异往往会影响实验结果。为寻求一种更加客观有效的实验平台,本实验运用Transwell技术建立SD(Sprague-Dawley)大鼠的大脑毛细血管内皮细胞(Endothelial cell,E)、星形胶质细胞(Astrocyte,A)及神经元(Neuron, N)三细胞原代共培养模型系统。与以往实验相比,原代培养的细胞仍保留原有在体部分特性,可以实现模拟类似于血脑屏障结构及其客观微环境下的存活、生长、分化、功能、损伤、修复及相互作用。为将来脑保护与脑损伤修复研究提供了一个科学可信的新平台。方法:通过本实验室的经验积累以及参考大量文献的实验方法,作者对SD大鼠的大脑毛细血管内皮细胞、星形胶质细胞、神经元进行原代培养,用葡萄糖转运体1(Glucose Transport 1,GLUT-1)胶质原纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein ,GFAP)、微管相关蛋白2(Microtubule-Associated Protein 2,MAP-2)分别鉴定标记大脑毛细血管内皮细胞、星形胶质细胞及神经元,并计算其纯度。利用Transwell将三种细胞按一定时间和空间的顺序建立EAN三细胞共培养模型系统。当系统稳定后,利用激光共聚焦成像系统,分别拍摄单独培养和EAN系统中星形胶质细胞的GFAP免疫荧光图像直观描绘其形态学特征,利用图像分析软件Image-pro Plus6.0对其GFAP阳性结构中心聚集面积和投射周围的长度及面积进行测量,根据统计学方法客观分析其形态学特征,同时利用三维重建技术,分析星形胶质细胞GFAP阳性结构投射在Transwell半透膜微孔中的生长情况。结果:一、EAN模型中星形胶质细胞的GFAP阳性结构中心聚集面积为940.00±178.15μm2。单独培养的星形胶质细胞的GFAP阳性结构中心聚集面积为1946±173.01μm2。两者差异具有统计学意义(P<0.05)。二、EAN模型中星形胶质细胞的GFAP阳性结构投射周围长度为156.33±17.64μm,面积为2196.00±241.50μm2。单独培养的星形胶质细胞的GFAP阳性结构投射周围长度为108.48±13.33μm,面积为515.50±156.84μm2。两者GFAP阳性结构投射周围长度差异具有统计学意义(P<0.05),两者GFAP阳性结构投射周围面积差异具有统计学意义(P<0.05)。三、在Transwell中半透膜的微孔发现有星形胶质细胞的GFAP阳性结构存在。结论:一、在EAN三细胞共培养的模型系统中,星形胶质细胞GFAP阳性结构形态与单独培养条件下存在差异。与之比较,EAN模型中星形胶质细胞的GFAP阳性结构中心聚集面积减小,而GFAP阳性结构投射周围长度和面积均增大。二、EAN模型中星形胶质细胞GFAP阳性结构能够沿着Transwell中半透膜的微孔,向种植有大脑毛细血管内皮细胞方向生长。

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一、摘要 6-11 （一）中文摘要 6-8 （二）英文摘要 8-11二、正文 11-31 （一）前言 11-12 （二）材料与方法 12-18 （三）结果 18-26 （四）讨论 26-28 （五）结论 28-29 （六）参考文献 29-31三、文献综述 31-40 （一）正文 31-36 （二）参考文献 36-40四、附录 40-44五、致谢 44

EAN脑保护与脑损伤修复三细胞模型系统中的星形胶质细胞形态特征

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