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Cobratoxin对小鼠小直径DRG神经元T型钙电流的影响及其信号转导机制研究

作　者: 张玲
导　师: 陶金
学　校: 苏州大学
专　业: 神经生物学
关键词: cobratoxin T型钙通道毒蕈碱型乙酰胆碱受体背根神经节镇痛
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin的镇痛作用及相关离子通道机制。方法:培养小鼠背根神经节（DRG）神经元细胞,利用全细胞膜片钳技术研究泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin对小直径的DRG神经元T型钙电流的作用,并用药理学方法（使用M型受体,G蛋白,PLC,PKC,PKA等的阻断剂或抑制剂）研究其信号通路作用机制。采用热板法,von Frey法,福尔马林法,醋酸扭体法等行为学方法研究泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin对小鼠的镇痛作用。结果:我们发现泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin能够剂量依赖性的抑制小鼠小直径背根神经节（DRG）神经元T型钙电流。Cobratoxin（0.5μM）可逆性地抑制了约22.3%的T型钙电流。这种抑制作用可以被毒蕈碱胆碱受体（M受体）拮抗剂阿托品和东莨菪碱,或选择性M4受体拮抗剂托吡卡胺所阻断,但是,阿片受体拮抗剂纳洛酮则不能阻断这种作用。在内液中加入GDP-β-S或者用百日咳毒素（PTX）对DRG细胞进行预处理,可以阻断泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin对T型钙电流的抑制作用。利用强去极化的前置脉冲,我们发现G蛋白的βγ亚单位没有参与cobratoxin对T型钙电流的抑制作用。将DRG细胞用蛋白激酶A（PKA）抑制剂H89孵育,或者在内液中加入PKI 6-22,能够阻断cobratoxin对T型钙电流的抑制作用,然而抑制蛋白激酶C（PKC）或磷脂酶C（PLC）则没有这种作用。鞘内注射cobratoxin（5μg/kg）对小鼠的热痛,机械痛和炎症痛都具有镇痛作用。而且,这种镇痛可以被托吡卡胺所阻断。结论:这些结果表明泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin通过激活M4受体进而偶联PTX敏感的G_i/o蛋白激活PKA信号通路来抑制T型钙电流,这种作用进而可能产生对小鼠的镇痛作用。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-11
材料和方法  11-18
  一、实验材料  11-13
  二、实验方法  13-18
结果  18-33
  一、Cobratoxin 剂量依赖性抑制小鼠小直径DRG 神经元T 型钙电流  18-21
  二、Cobratoxin 通过毒蕈碱型乙酰胆碱受体（mAChR）抑制 T 型钙电流  21-23
  三、毒蕈碱型乙酰胆碱受体（mAchR）亚型在小鼠 DRG 上的表达  23-25
  四、Cobratoxin 通过M4 受体抑制T 型钙电流  25
  五、Cobratoxin 通过PTX 敏感的G 蛋白途径抑制T 型钙电流  25-27
  六、Cobratoxin 通过PKA 途径抑制T 型钙电流  27-29
  七、Cobratoxin 对小鼠热痛，机械痛和炎症痛具有镇痛作用  29-33
讨论  33-36
  一、M4 受体介导了cobratoxin 对T 型钙电流的抑制作用  33-34
  二、PKA 参与了cobratoxin 抑制T 型钙电流的反应  34-35
  三、M4 受体激活抑制T 型钙电流可能产生镇痛  35-36
结论  36-37
参考文献  37-43
综述  43-57
  参考文献  50-57
攻读硕士学位期间公开发表的论文  57-58
缩略词表  58-60
致谢  60-61

Cobratoxin对小鼠小直径DRG神经元T型钙电流的影响及其信号转导机制研究

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