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冬凌草甲素诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡与分化的研究

作　者: 涂学亮
导　师: 杜英；秦东春
学　校: 郑州大学
专　业: 免疫学
关键词: APL 白血病冬凌草甲素凋亡活性氧 PML-RARα
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 23次
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内容摘要

目的:白血病是严重危害人类健康的恶性疾病,寻找诱导白血病细胞凋亡与分化的诱导剂一直是研究的热点。急性早幼粒细胞白血病(APL)占急性髓系白血病的(AML)5%～8%,95%以上的患者具有特征性染色体t(15;17)(15q22;17q21),形成早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα)融合基因,并表达PML-RARα融合蛋白。本论文分别就高剂量冬凌草甲素诱导APL细胞凋亡及机制和低剂量冬凌草甲素协同全反式维甲酸(ATRA)诱导白血病细胞分化及机制进行初步研究。方法:常规培养急性单核性白血病细胞系NB4与NB4-R1细胞,用不同浓度的冬凌草甲素(1-6μg/ml)处理NB4和NB4-R1细胞3d。分别采用苔盼蓝染色法检测细胞存活率、Annexin V-FITC与PI双染流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期;利用荧光探针二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)进行细胞内活性氧检测;通过细胞形态学观察、FCM检测CD11b表达和NBT还原试验检测低剂量冬凌草甲素协同ATRA诱导白血病细胞的分化作用;采用SDS-PAGE和蛋白印迹(Western Blot)技术观察细胞内多聚腺苷酸聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的表达,研究高剂量冬凌草甲素诱导APL细胞凋亡及机制以及低剂量冬凌草甲素协同ATRA诱导白血病细胞分化的分子机制。结果:发现冬凌草甲素在凋亡出现之前活性氧(ROS)明显升高,而ROS阻断剂NAC抑制冬凌草甲素诱导活性氧的产生,同时也阻断了冬凌草甲素诱导的凋亡。低剂量冬凌草甲素与低剂量的ATRA都不能诱导NB4、NB4-R1细胞分化,而联合用药不仅能够诱导ATRA敏感细胞NB4的分化,而且能够诱导ATRA耐药细胞NB4-R1的分化。进一步的研究发现,冬凌草甲素能够增加RARα及RARα的靶基因表达。结论:高剂量冬凌草甲素触发细胞凋亡可能是通过活性氧信号通路实现的。冬凌草甲素能够抑制ATRA诱导RARα的降解,从而使得冬凌草甲素协同ATRA的分化作用。这些问题的阐明将为APL患者的治疗开拓新的方向,提供有价值的线索。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-8
第一部分高剂量冬凌草甲素触发急性早幼粒白血病细胞凋亡及机制的研究  8-22
  引言  8
  1 材料与方法  8-14
  2 结果  14-19
  3 讨论  19-21
  4 结论  21-22
第二部分低剂量冬凌草甲素协同ATRA诱导急性早幼粒白血病细胞分化及机制的研究  22-31
  引言  22
  1 材料与方法  22-24
  2 结果  24-28
  3 讨论  28-30
  4 结论  30-31
参考文献  31-35
综述一 PML/RARα融合基因  35-41
  参考文献  38-41
综述二活性氧与细胞凋亡  41-51
  参考文献  48-51
中英文缩略词对照表  51-52
2005-2008年发表和待发表论文目录  52-53
致谢  53

冬凌草甲素诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡与分化的研究

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