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抗菌肽Selysin的表达及其对肝癌细胞HepG2的毒性作用

作　者: 舒慕娅
导　师: 陈正望
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物物理学
关键词: 家蝇抗菌肽 Selysin Hep G2 细胞凋亡
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 38次
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内容摘要

尽管在征服癌症的道路上,我们已经取得了卓越的成就。但是对癌症的治疗仍然存在许多障碍,例如发现很多癌细胞对药物产生了抗性,所以开发新的抗癌药物有着巨大的治疗意义和经济价值。家蝇(Musca domestica),属于昆虫纲双翅目环裂亚目的家蝇科,是我国大部分地区最常见和数目最多的一种,它的体内存在大量的抗菌肽。研究发现这些抗菌肽不但能抗菌,而且有的还能起到抗癌作用。了解这些抗菌肽的抗癌作用机理,对我们开发新的抗癌药物有着重要意义。本论文以融合表达的一种新的抗菌肽Selysin为研究对象,探索其抗癌功能。实验发现它对于癌细胞的增殖有一定的抑制功能。因此,我们研究它在抗癌细胞过程中的作用,并希望能更深入了解抗菌肽Selysin的抗癌机理。为了获得大量的Selysin重组肽,根据毕赤酵母对蛋白编码的偏好性,我们构建了融合表达载体,并将其转入到毕赤酵母表达菌株中,表达出抗菌肽Selysin。这为以后大量得到抗菌肽Selysin提供了便利,同时也有助于我们进一步研究抗菌肽Selysin抗癌及抗菌的作用机理。在实验中,我们发现当用3H-TdR掺入法检测抗菌肽Selysin对肝癌细胞HepG2作用时,Selysin能够对HepG2的增殖有抑制作用。抗菌肽Selysin在高浓度条件下能明显抑制HepG2细胞对3H-TdR摄取量而在低浓度下没有这种现象。还发现抗菌肽Selysin在高浓度能通过破膜作用使得HepG2细胞死亡。同时,用不同浓度的抗菌肽Selysin处理HepG2时,又发现在低浓度处理条件下Selysin能激活caspase-3,而caspase3是在细胞凋亡中的重要标志性分子。推测抗菌肽Selysin在特定的浓度下可以通过Caspase信号途径来激活细胞凋亡从而产生抗癌作用。我们的研究结果预示抗菌肽Selysin在未来对癌症治疗的应用上会有广阔的前景。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
1 前言  7-23
  1.1 抗菌肽的研究  7-16
  1.2 细胞凋亡途径的研究进展  16-21
  1.3 本课题的研究目的和意义  21-23
2 材料和方法  23-41
  2.1 实验菌株，细胞株及质粒  23
  2.2 重要仪器和耗材  23
  2.3 质粒提取  23-24
  2.4 E.COLI.超级感受态细胞制作  24-25
  2.5 融合肽的构建  25-35
  2.6 细胞培养  35-36
  2.7 3H-TDR 掺入法  36-37
  2.8 WESTERN BLOT  37-41
3 实验结果与分析  41-47
  3.1 抗菌肽SELYSIN 的表达与纯化  41-45
  3.2 抗菌肽SELYSIN 对肝癌细胞HEPG2 的DNA 合成有抑制效应  45-46
  3.3 抗菌肽SELYSIN 对肝癌细胞HEPG2 的作用与细胞凋亡信号通路的关系  46-47
总结和展望  47-49
致谢  49-50
参考文献  50-62

抗菌肽Selysin的表达及其对肝癌细胞HepG2的毒性作用

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