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麻醉药代谢相关P450在慢性肝脏疾患中改变机制的研究

作　者: 杨立群
导　师: 吴孟超；俞卫锋
学　校: 第二军医大学
专　业: 外科学（肝外）
关键词: CYP3A4 CYP2E1 肝硬化胆汁淤积原代培养异丙酚
分类号: R657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

人肝微粒体中的细胞色素 P450氧化酶（Cytochrome P450s CYP450）是一组由许多同工酶组成的超基因大家族，对大多数内源、外源性化合物在体内的生物转化有重要作用，在药理学和毒理学研究中有极其重要的意义。目前，对药物代谢的研究国内外许多文献均己进入肝微粒体水平，国外有关P450的研究进展很快，现已在人类肝微粒体中发现近200种P450同工酶。其中CYP3A4 及CYP2E1分别是临床大多数静脉麻醉药及卤代类吸入麻醉药I相代谢的主要靶酶，目前国内麻醉学家对这两种酶研究尚处于起步阶段。肝炎后肝硬化和胆汁淤积均为我国常见的慢性肝胆疾患，病理状态下P450 同工酶的改变及其机制却往往被忽视，明确肝脏本身疾患对P450的影响是研究病理状态下药酶改变的基础。本实验首先从临床肝胆疾病入手，取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疽及肝血管瘤患者的肝组织标本，以后者为正常对照。100，000g 超速离心制备肝微粒体，Lowry法测定微粒体蛋白量，CO差示法测定肝总P450 含量，Nash法测定CYP3A4酶活性，Western blot测定同工酶蛋白的表达量，旨在为深入研究CYP450在药物代谢中的作用提供一直接、可靠的方法。并采用一步法抽提肝组织总RNA，随机引物标记法制备CYP3A4及CYP2E1cDNA 探针，Northern杂交比较肝硬化和黄疸肝脏中的CYP3A4和CYP2E1相关mRNA 表达与正常肝的差异并进一步探讨其临床药理学意义。最后应用原代培养人肝细胞，观察全麻药异丙酚对原代培养肝细胞中CYP3A4活性及蛋白表达的影响，旨在从药物间相互作用的角度阐明麻醉药相关P450的改变机制实验结果显示： 1．三组患者微粒体蛋白量及肝总P450含量无显著差异，肝炎后肝硬化患者CYP3A4活性、蛋白表达量较正常肝显著降低，阻塞性黄疽该酶改变与正常肝相差不显著； 2．cyp3a4及 cyp2e1 mRNA在正常肝组织中均呈高水平表达，而且个体间差异不如国外文献报道的显著。肝炎后肝硬化患者 cyp3A4 mRNA显著低于正常肝，胆汁淤积患者该基因表达与正常肝差异不显著，相反胆汁淤积患者cyp2e1 mRNA表达水平显著低于正常肝及肝硬化患者。二第二军医大学硕士论文中文摘要 3．临床相关浓度（0刀5 InM）的异丙酚即可抑制CYP3A4同工酶的活性，而且其抑制作用与浓度呈正相关，但临床剂量的异丙酚对该同工酶蛋白的表达并无显著影响，直至远大于临床浓度门 InM）的异丙酚才轻度抑制CYP3A4蛋白表达。由此得出结论：不同慢性肝胆疾患将导致P450同工酶内部组成的改变，肝硬化患者由于 CYP3A4活性显著降低，以及同工酶含量和表达的减少，患肝代谢CYP3A4底物（包括常用静脉麻醉药和阿片类镇痛药）的能力可能也随之下降；阻塞性黄疽患者由于 CYPZEI表达的减少，可能影响卤代类吸入麻醉药在体内的生物转化，在特定的情况下，尚可能改变上述底物代谢的途径。此外，临床常用麻醉药异丙酚对CYP3A4将产生明显的抑制作用，可能是一潜在的P450抑制剂，会导致CYP3A4底物的生物转化速率的下降，提示在临床工作中不同麻醉药伍用时，不仅要从药效学上考虑，更应从药代角度考虑可能引起的药物间相互作用。

全文目录

  4-5
  5-6
  6-8
  8-9
前言  9-11
第一部分肝细胞微粒体的制备和细胞色素P450氧化酶测定  11-22
  材料与方法  11-14
  结果  14-18
  讨论  18-22
第二部分 CYP3A4及 2E1基因在肝硬化及黄疸肝组织中的表达  22-33
  材料与方法  22-25
  结果  25-29
  讨论  29-33
第三部分异丙酚对原代培养人肝细胞CYP3A4的抑制作用及其机制  33-42
  材料与方法  33-35
  结果  35-38
  讨论  38-42
小结  42-44
综述:细胞色素P450与麻醉药物代谢  44-59
附录－1：pBSM13质粒图谱  59-60
附录-2:Cyp3a4基因的全长cDNA序列图  60-62
致谢  62

麻醉药代谢相关P450在慢性肝脏疾患中改变机制的研究

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