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米曲霉菌株的诱变选育及其制剂的应用研究

作　者: 孙春华
导　师: 常维山；牛钟相
学　校: 山东农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 米曲霉诱变育种粗酶制剂生产性能
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 247次
引　用: 4次
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内容摘要

以米曲霉3.4383作为原始菌株,经紫外、EMS复合诱变,通过培养筛选,得到一株高产蛋白酶和纤维素酶的变异菌株UV-2’。其蛋白酶和纤维素酶活比原始菌株(蛋白酶2526U/g,纤维素酶987U/g)提高到3250U/g和1145U/g,传代培养20代,菌株遗传稳定性好。确定复合诱变条件为:紫外线照射用30W紫外灯,距离为28cm,照射时间为60s,EMS浓度为0.8%。复合诱变之后,从中筛选出一株蛋白酶活力高的菌株UV-2’,其蛋白酶活和纤维素酶活较出发菌株分别提高29%和16%。研究发酵培养条件对菌株产酶影响中发现:碳氮源、活性剂、培养基的料水比对菌株产酶都有影响;发酵温度、发酵时间、pH、无机盐等对菌株产酶也有影响。通过单因素试验确定的培养条件为:吐温-80含量0.24%,料水比为5/3,pH7.5,在40℃下,发酵84h,酶活可达3250U/g和1145U/g干曲。探索出了FeSO4能强烈抑制菌株产酶,加入KNO3菌株产酶大大提高;并进一步研究了不同氮源和碳源对米曲霉UV-2’产蛋白酶和纤维素酶的影响。确定了饲料酶制剂生产中最佳的氮源和碳源分别为豆粕和麸皮,进一步研究了发酵培养基中麸皮:豆粕=1:5。最后以上述各单因素试验结果做参照,设计正交试验来确定综合因素对菌株产酶的影响,通过正交试验结果可知,发酵培养物的最适合条件为:培养基在豆粕含量60%,麸皮含量10%,添加0.2%的KNO3,吐温-80含量在0.24%,料水比在5/3,pH7.5时产蛋白酶可达4572U/g、纤维素酶可达1923 U/g。选择1日龄商品代AA肉鸡,研究分别在玉米-豆粕型和玉米-小麦-豆粕型日粮中添加粗酶制剂对肉鸡生产性能、肠道菌群及免疫器官发育的影响。结果表明,添加粗酶制剂显著降低了肉鸡的料肉比(P < 0.05),有提高肉鸡1-42日龄日增重和出栏体重的趋势(P < 0.10);促进了肉鸡免疫器官发育提高了免疫功能,并能够促进肉鸡肠道中乳酸杆菌的增殖,减少肠道大肠杆菌的数量,从而在一定程度上改善肉鸡的肠道微生态环境;在玉米-小麦-豆粕型日粮中添加粗酶制剂可以显著降低肉鸡食糜的黏度(P < 0.05);添加粗酶制剂显著提高了肉鸡食糜中蛋白酶活(P < 0.05),并有提高粗蛋白回肠表观消化率的趋势(P < 0.10),对肉鸡食糜中淀粉酶活和淀粉的回肠表观消化率影响不显著(P > 0.05)。本研究结果揭示,添加粗酶制剂可以改善肉鸡的生产性能。

全文目录

中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
前言  12-26
  1. 米曲霉的生物学特征  12
  2. 米曲霉在工业上的应用  12-16
  3. 蛋白酶的性质及其应用  16-18
  4. 纤维素酶的性质及其应用  18-24
  5. 紫外线、EMS 的诱变原理和机制  24-26
实验研究  26-76
  试验一米曲霉高产蛋白酶和纤维素酶菌株的诱变选育  26-40
    1 材料  27-29
    2 方法  29-32
    3 结果与分析  32-38
    4 讨论  38-40
  试验二米曲霉发酵条件的优化研究  40-55
    1 材料  40
    2 方法  40-42
    3 结果与分析  42-53
    4 讨论  53-55
  试验三米曲霉发酵粗酶制剂对肉鸡生产性能的影响  55-76
    1 材料和方法  55-64
    2 结果与分析  64-73
    3 讨论  73-76
结论  76-77
附图  77-78
参考文献  78-89
就读硕士期间发表的主要论文  89-90
致谢  90

米曲霉菌株的诱变选育及其制剂的应用研究

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