学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

肺炎嗜衣原体Cpn0425重组蛋白的克隆表达及诱导THP-1细胞产生前炎症细胞因子和凋亡的研究

作　者: 肖光文
导　师: 吴移谋
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 肺炎嗜衣原体 Cpn0425 THP-1细胞 前炎症细胞因子 细胞凋亡
分类号: R374
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 19次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的:构建重组质粒pGEX6p-2/Cpn0425,在E.coli BL21中进行诱导表达,纯化获得重组融合蛋白Cpn0425。研究该重组蛋白在体外诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子IL-8和IL-1β的水平及诱导细胞凋亡的作用,为进一步探索Cpn感染致病的分子机制提供试验依据。方法: PCR扩增肺炎嗜衣原体Cpn0425蛋白编码基因,构建pGEX6p-2/Cpn0425重组质粒,测序正确后在E.coli BL21中诱导表达,用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定。用谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)琼脂糖凝胶FF纯化重组蛋白,A280紫外分光光度法测定纯化蛋白浓度,用鲎试验法检测纯化后蛋白的内毒素。用ToxinEraser纯化柱去除内毒素后用不同浓度的GST-Cpn 0425刺激THP-1细胞;ELISA法检测经刺激后的THP-1细胞产生的IL-8和IL-1β水平;以WST-1法检测经GST-Cpn0425处理后THP-1细胞的增生或抑制作用;用Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、AnnexinV-FITC-PI染色法检测细胞凋亡情况。结果:构建了重组质粒pGEX6p-2/ Cpn0425,并在E.coli BL21菌中高效表达出Mr约为50kDa的GST-Cpn 0425目的蛋白,超声裂解后SDS-PAGE分析目的蛋白在菌体细胞内以可溶性形式表达,经采用默克Novagen的GST纯化树脂纯化获得纯度在95%以上的重组蛋白。GST-Cpn0425能诱导THP-1细胞表达IL-8和IL-1β,并以时间、剂量依赖方式刺激细胞分泌前炎症细胞因子IL-8和IL-1β,当GST- Cpn0425的浓度为6μg/mL时产生的IL-8量最多,为(716.11±41.26)pg/mL当GST- Cpn0425的浓度为8μg/mL时产生的IL-1β量最多,为(32.91±5.49)pg/mL;当GST-Cpn0425刺激THP-1细胞24h时产生的IL-8和IL-1β量则达到高峰。另外GST-Cpn0425以剂量依赖方式抑制THP-1细胞增殖;当12μg/mL GST-Cpn处理THP-1细胞48h后,形态学上,细胞表现为皱缩、核碎裂、细胞起泡及凋亡小体等凋亡特征。结论:1.成功克隆Cpn0425基因并构建了pGEX6p-2/Cpn0425原核表达载体,将其转化至E.coli BL21后能高效表达出一相对分子质量约50kDa的GST- Cpn0425融合蛋白;2. Cpn0425蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和IL-1β;3. Cpn 0425蛋白既能抑制THP-1细胞增殖,又能诱导其凋亡。

全文目录


主要缩略语英文索引  4-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-14
实验材料  14-16
实验方法  16-27
实验结果  27-39
讨论  39-43
结论  43-44
参考文献  44-49
附录  49-50
文献综述  50-57
  参考文献  55-57
成果目录  57-58
致谢  58

相似论文

  1. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  2. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  3. 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究,X174
  4. 地克珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子甘油醛-3-磷酸脱氢酶的影响,S858.31
  5. PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探,S858.28
  6. β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
  7. 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
  8. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  9. 沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响,S828
  10. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对鸡软骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,S858.31
  11. Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
  12. 高糖对THP-1源性巨噬细胞趋化因子配体16表达和分泌的影响及阿司匹林的干预作用,R587.2
  13. 凋亡调控因子Survivin、XIAP以及c-Jun、NF-κB在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义,R737.31
  14. Edaravone促进大鼠坐骨神经损伤早期功能恢复的实验研究,R965
  15. 核蛋白SET丝氨酸9位点模拟磷酸化对PP2A的抑制作用,R749.16
  16. 核糖体蛋白RPS8对蛋白质翻译的影响及其机制的研究,Q753
  17. 睾丸酮对Aβ_（25-35）诱导PC12细胞凋亡保护机制的研究,R749.16
  18. 支架置入术后血管正性重构相关机制研究,R541.4
  19. COPD模型大鼠骨骼肌细胞凋亡及JNK、p38表达的实验研究,R563.9
  20. 过度运动可引起大鼠冈上肌腱损伤和腱细胞凋亡,R363
  21. 过度运动可引起大鼠膝关节软骨细胞的凋亡,R363

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 衣原体属
© 2012 www.xueweilunwen.com