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睾丸酮对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡保护机制的研究

作 者: 张建峰
导 师: 洪震;祖衡兵
学 校: 复旦大学
专 业: 神经病学
关键词: 阿尔茨海默病 细胞凋亡 睾丸酮 凋亡相关蛋白 β淀粉样蛋白
分类号: R749.16
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是老年人群中高发的神经系统变性疾病,发病机制至今尚未完全明确,目前认为伴随着衰老的体内性激素水平下降是导致AD发病的重要病因之一。进一步阐明体内性激素在AD发病中的作用对于AD发病机制的研究和AD的临床防治有重要意义。本课题从细胞活性、细胞形态学、凋亡相关蛋白的表达与凋亡相关基因转录水平四个方面观察睾丸酮对体外培养的嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡活动的影响,为进一步研究AD的发病机制和临床治疗提供理论依据。本课题主要包括三个部分:第一部分:睾丸酮对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡后细胞活性的影响采用MTT分析法检测睾丸酮对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡活性的影响。预先以含不同终浓度Aβ25-35的培液孵育PC12细胞24小时后,PC12细胞活性明显下降,且下降程度与Aβ25-35浓度相关,其IC50大约在20μM左右;进一步我们以含不同浓度睾丸酮的培液预保护12小时,再以20μMAβ25-35诱导PC12细胞凋亡,结果显示PC12细胞活性下降受到明显抑制,在一定范围内随睾丸酮浓度增加作用增强,其IC50大约在50μM左右;在含睾丸酮培液中加入100μM的氟他胺后,再以20μM Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,睾丸酮对PC12细胞保护作用受到明显抑制。从上述实验结果可以推断睾丸酮可以明显抑制Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡后细胞活性下降,其作用途径可能受雄激素受体所介导。第二部分:睾丸酮对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡形态学影响采用Hochest-PI双染色法观察睾丸酮对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡后细胞形态学的影响,本实验中我们设置四个处理组:①正常对照组;②睾丸酮预保护组;③Aβ25-35处理组;④氟他胺处理组。Hochest-PI双染色后发现Aβ25-35处理组凋亡PC12细胞数量显著增加,而睾丸酮保护后凋亡细胞数量明显减少,预先予以氟他胺干预后,睾丸酮作用受到明显抑制。上述实验结果从形态学上进一步证实睾丸酮可以抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡活动,第三部分:睾丸酮对PC12细胞凋亡相关调控因子Bcl-xl、Bax表达的影响本部分包括实验三和实验四,每次实验各设4个处理组:①正常对照组;②睾丸酮预保护组;③Aβ25-35处理组;④氟他胺处理组。实验三采用Western-blot免疫印迹法检测各实验组Bcl-xl、Bax的蛋白表达,实验四采用Real-time PCR检测各实验组Bax、Bcl-xl mRNA的表达。实验结果显示Aβ25-35处理组PC12细胞Bax蛋白及Bax mRNA表达均明显上调、Bcl-xl蛋白及Bcl-x1 mRNA表达明显下调(P<0.05);睾丸酮保护后PC12细胞Bax蛋白及Bax mRNA表达均明显下调、Bcl-xl蛋白及Bcl-xlmRNA表达明显上调(P<0.01);予以氟他胺干预后与睾丸酮保护组相比Bcl-xl蛋白及Bcl-xl mRNA的表达明显下降、Bax蛋白及Bax mRNA的表达明显上调(P<0.05)。因此结合上述实验结果我们推断,睾丸酮抗细胞凋亡作用可能与上调Bcl-x1、下调Bax的表达有关,其作用途径可能是通过雄激素受体介导发挥抗细胞凋亡作用。综上所述,通过本实验研究我们认为:[1]Aβ25-35体外条件下可以诱导PC12细胞发生凋亡;[2]睾丸酮可以明显抑制Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡活动,其作用途径可能是通过雄激素受体介导的机制;[3]睾丸酮抗PC12细胞凋亡活动潜在机制可能是通过在蛋白表达和基因转录水平上抑制Bax、上调Bcl-xl的表达实现的。

全文目录


缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
引言  11-13
实验一  13-20
  1.实验材料与细胞干预  13-14
  2.实验方法MTT实验检测细胞活性  14-15
  3.统计学方法  15
  4.结果  15-18
  5.讨论  18-20
实验二  20-23
  1.实验材料  20
  2.实验方法Hoechst-IP双标记染色  20-21
  3.结果  21
  4.讨论  21-23
实验三  23-29
  1.实验材料与细胞干预  23-24
  2、实验方法Western-blot实验(免疫杂交)  24-27
  3.统计学方法  27
  4.结果  27-29
实验四  29-36
  1.实验材料与细胞干预  29-30
  2.Real-timePCR实验  30-31
  3.统计学方法  31-32
  4.结果  32-34
  5.讨论  34-36
论文小结  36-37
  实验结果  36
  实验结论  36-37
参考文献  37-40
综述  40-49
  参考文献  45-49
附件  49-50
致谢  50-51

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 精神病学 > 脑器质性精神障碍 > 老年及早老性精神障碍
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