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Wnt拮抗因子SFRP1在膀胱癌中的甲基化和异常表达

作　者: 王晓彬
导　师: 宋永胜
学　校: 中国医科大学
专　业: 泌尿外科
关键词: 膀胱癌 SFRP1 Wnt 甲基化 癌旁正常组织 表达下调 mRNA frizzled 癌旁组织 bladder 肿瘤组织 因子 蛋白表达 组织中 拮抗 信号通路 基因沉默 多克隆抗体 myc catenin
分类号: R737.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


前言Wnt信号通路参与了成体组织细胞的增殖、分化及凋亡过程。因此异常的Wnt信号转导过程常导致肿瘤生成。近年来,Wnt信号通路上游成分出现异常参与肿瘤发病逐渐被发现。Wnt1、Wnt2、Wnt3a等Wnt家族成员过度表达均被发现可诱导肿瘤生成。此外,Wnt拮抗因子表达下调所致Wnt信号通路过度激活亦常诱导肿瘤发生。例如Dkk家族表达下调参与了部分肿瘤的发病过程。最近,分泌型frizzled相关蛋白1(SFRPl)表达沉默在肿瘤中被发现。做为泌尿系统中最常见的肿瘤,膀胱癌的发病机制目前仍不是十分清楚。研究显示Wnt通路异常改变亦参与了膀胱癌的发病。例如Wnt7b被发现在表浅膀胱癌中表达显著高于正常膀胱组织。Wnt5A亦被发现在多个膀胱癌细胞系中存在表达。此外,Wnt抑制因子1(WIF1)在膀胱癌中表达被下调,引起Wnt/p-catenin信号通路激活,导致Wnt靶基因c-myc和cyclinD1表达上调。在本研究中,我们对SFRP1在膀胱癌中的表达情况及其机制进行研究,以探讨SFRP1表达改变在膀胱癌发病机制中的作用。材料与方法一、材料膀胱癌及相应的癌旁组织各45例,来自于中国医科大学附属盛京医院。标本获取后即冷冻于液氮之中。人类膀胱癌细胞系T24、5637和SCaBER均购自上海坤肯生物化工有限公司。Trizol试剂和RT-PCR试剂盒购自于大连宝生物公司。GENMED基因甲基化检测试剂盒购自于上海杰美公司。SFRP1多克隆抗体购自于美国SANTA CRUZ公司。二、方法人类膀胱癌细胞系T24、5637和SCaBER均培养于RPMI 1640中,添加10%肽牛血清,青霉素(100IU／ml)及链霉素(100μg/ml)。采用饱和氯化钠法进行DNA提取。采用Trizol法进行RNA提取。采用逆转录PCR(RT-PCR)进行SFRP1 mRNA定性检测。采用甲基化特异性PCR (MSP)检测SFRP1基因甲基化状态。采用Western blotting检测SFRP1蛋白表达。三、统计学分析膀胱癌组织和癌旁正常组织之间甲基化频率的比较采用x2检验,mRNA表达比较采用t检验,P<0.05为有显著性差异。结果一、SFRP1基因在膀胱癌和癌旁正常组织中的甲基化及表达状态在45例膀胱癌组织中,28例(62.2%)被检出存在SFRP1甲基化现象。在其相应的癌旁正常组织中,仅有6例(13.3%)存在SFRP1甲基化。膀胱癌中SFRP1甲基化频率显著高于癌旁组织(P<0.01)。10例膀胱癌(5例发生了SFRP1甲基化)及其相应的癌旁正常组织中SFRP1 mRNA表达状态被检测。检测结果显示SFRP1 mRNA在5例发生甲基化的膀胱癌组织中表达明显低于其相应的癌旁正常组织(P<0.01)。在5例未发生甲基化的膀胱癌中,SFRP1 mRNA表达和癌旁正常组织中的表达没有显著差异。二、SFRP1基因在膀胱癌细胞系中的甲基化及表达状态SFRP1在膀胱癌细胞系T24和5637中发生甲基化,而SCaBER未检出SFRP1甲基化。T24和5637中未检测出SFRP1 mRNA和蛋白表达,SCaBER中检出SFRP1 mRNA和蛋白表达。三、去甲基化试剂对SFRP1基因在膀胱癌细胞系中表达的影响采用去甲基化试剂5′—氮杂—脱氧胞苷酸(DAC,1μg/ml)对发生甲基化的膀胱癌细胞系T24和5637进行作用,6个小时后进行检测。SFRP1 mRNA和蛋白在T24和5637中出现表达。结论1、SFRP1在部分膀胱癌中存在甲基化现象。2、SFRP1在部分膀胱癌中表达下调,其机制主要由SFRP1基因甲基化所致。3、SFRP1甲基化及表达下调,可能通过异常激活Wnt信号通路参与了部分膀胱癌的发病过程。

全文目录


一、摘要  4-10
  中文论著摘要  4-7
  英文论著摘要  7-10
二、英文缩略语  10-11
三、论文  11-26
  前言  11-12
  材料和方法  12-18
  结果(附图、附表)  18-21
  讨论  21-25
  结论  25-26
四、本研究创新性自我评价  26-27
五、参考文献  27-30
六、附录  30-39
  综述  30-37
  在学期间科研成绩  37-38
  致谢  38-39
  个人简历  39

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 泌尿器肿瘤 > 膀胱肿瘤
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