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非CO_2依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24细胞增殖的影响

作　者: 张琳刚
导　师: 张天禹
学　校: 桂林医学院
专　业: 泌尿外科
关键词: T-24膀胱癌细胞 非CO2依赖 survivin caspase-3
分类号: R737.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的探讨非CO2依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24细胞增殖的影响,非CO2依赖型细胞培养系统与CO2依赖型细胞培养系统有无区别。方法对膀胱癌T-24细胞采取非CO2依赖型细胞培养系统在（37℃、大气环境）培养箱（称为大气-B组）和（37℃、5%CO2）培养箱（称为CO2-B组）条件下,及CO2依赖型细胞培养系统在（37℃、大气环境）培养箱（称为大气-A组）和（37℃、5%CO2）培养箱（称为CO2-A组）条件下进行培养,检测分析两种体系培养基连续7天pH的比较;采用细胞增殖曲线及克隆形成实验检测细胞生长差异情况;采用流式细胞术检测分析两种系统对细胞周期及凋亡率影响的比较;并使用RT-PCR、Western blot技术检测分析两种系统下的膀胱癌细胞中survivin、caspase-3基因及蛋白的表达情况。结果1、pH值:非CO2依赖型细胞培养系统（37℃、大气环境）培养箱条件下培养基与CO2依赖型细胞培养系统（37℃、5%CO2）培养箱条件下培养基连续7天pH值稳定在7.4左右（P>0.05）;而CO2依赖型细胞培养系统（37℃、大气环境）培养箱条件下培养基pH值在8.8左右,其高于CO2依赖型细胞培养系统（37℃、5%CO2）培养箱条件下培养基pH值（P<0.05）。2、细胞克隆数:大气-B组细胞克隆数（324±11）与CO2-A组（320±15）细胞克隆数基本相同（P>0.05）;而大气-A组细胞克隆数（66±6）比CO2-A组细胞克隆数减少（P<0.05）。3、细胞生长增殖曲线:大气-B组与CO2-A组细胞生长增殖趋势基本一致（P>0.05）;而大气-A组比CO2-A组细胞生长增殖下降（P<0.05）。4、细胞凋亡率:细胞在大气-B组与CO2-A组条件下培养,随着作用时间的延长细胞凋亡数增加,凋亡率相比无明显变化（P>0.05）;而在大气-A组条件下比CO2-A组条件下细胞凋亡数增加（P<0.05）。5、RT-PCR及Western blot:细胞在大气-B组与CO2-A组条件下培养,表达survivin、caspase-3因子及蛋白无明显变化（P>0.05）;而在大气-A组条件下随着培养时间的延长,caspase-3因子及蛋白表达增高, survivin mRNA的表达并未明显变化,比CO2-A组条件下条件下表达上调（P<0.05）。结论膀胱癌非CO2依赖型细胞培养系统对细胞增殖、基因表达等方面与膀胱癌CO2依赖型细胞培养系统无明显区别。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
符号说明  10-11
前言  11-13
非C0_2依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24 细胞增殖的影响  13
1 材料和方法  13-22
  1.1 主要仪器设备  13
  1.2 实验材料及主要试剂  13-14
  1.3 试剂的配制  14-15
  1.4 实验分组  15-16
  1.5 细胞培养  16
  1.6 两种系统培养基pH 值测定  16-17
  1.7 克隆形成计数  17
  1.8 细胞增殖曲线测定  17
  1.9 流式细胞仪检测细胞的凋亡率及对细胞周期的影响  17
  1.10 survivin、caspase-3 测定  17-19
  1.11 West blot 法survivin、caspase-3 蛋白测定  19-22
  1.12 统计学处理  22
2 结果  22-28
  2.1 培养基pH 值的比较  22-23
  2.2 克隆数的比较  23-24
  2.3 增殖曲线的比较  24
  2.4 细胞周期及凋亡率的比较  24-26
  2.5 survivin、caspase-3 因子的表达比较  26-27
  2.6 survivin、caspase-3 蛋白的表达比较  27-28
3 讨论  28-30
参考文献  30-32
附录  32-47
  综述  32-46
    综述参考文献  42-46
  附录 2  46-47
致谢  47-49
攻读硕士学位期间发表的论文  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 泌尿器肿瘤 > 膀胱肿瘤
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