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抑癌基因TSPYL5在胃癌发生发展中的作用及机制的初步研究

作 者: 翟競
导 师: 夏建国
学 校: 南京医科大学
专 业: 普外科
关键词: TSPYL5 β-catenin Wnt信号通路 抑癌基因 甲基化
分类号: R735.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


目的:探讨睾丸特异性Y样蛋白5(testis-specific Y-like protein 5,TSPYL5)的表达对胃癌生物学行为的影响。研究TSPYL5在胃癌发生发展中对Wnt/β-catenin信号通路可能的作用机制。方法:1. RT-PCR、荧光定量PCR、免疫荧光技术检测胃癌组织及癌旁正常组织中TSPYL5的表达情况。2. MTT、克隆形成实验检测TSPYL5在胃癌细胞株AGS中的作用。3.荧光素酶报告基因、western blot、免疫组化、免疫荧光技术研究TSPYL5是否通过影响Wnt/β-catenin信号通路的关键分子β-catenin来发挥作用结果:1.选取46例胃癌组织及相对应的癌旁正常组织进行RT-PCT、免疫荧光技术检测表明,与相对应的癌旁正常组织相比,胃癌组织中的TSPYL5mRNA表达存在下调或者缺失。同时在对23例癌旁正常组织,25例胃癌组织进行的荧光定量PCR分析中也表明在胃癌组织中,TSPYL5表达明显下调,并具有统计学意义(P<0.05)。以上结果经过统计学分析后提示TSPYL5 mRNA表达与肿瘤的大小,组织学分级、浸润深度以及淋巴结受累情况之间无统计学意义,但在TNM分期中的Ⅱ、Ⅲ期以及无腹腔和远处转移时TSPYL5mRNA明显下调(P<0.05)。2. MTT增殖实验结果显示pc-DNA-TSPYL5转染组从第一天开始和对照组相比各时间点细胞增殖能力均受到明显抑制,至第五天pc-DNA-TSPYL5转染组吸光度值为0.48,pc-DNA空转染组吸光度值为0.75,空对照组吸光度值为1.20,差异具有统计学意义(P<0.05)。在克隆形成实验中,我们以在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数,计算克隆形成率,以空质粒组为100%,转染TSPYL5的AGS细胞株的克隆形成率约为18.6%,结果显示转染了TSPYL5的AGS细胞株生长受到明显的抑制。3.针对46对胃癌及癌旁正常组织进行免疫组化分析β-catenin,结果示约有47.8%(22/46)的胃癌组织标本β-catenin呈现异常阳性表达。同时,我们将收集的46例胃癌及癌旁正常组织标本进行western blotting分析TSPYL5和β-catenin的表达,结果发现在相对早期胃癌及癌旁正常组织中(I、II期)TSPYL5下调明显,同时β-catenin表达上调。在AGS细胞株中,分别转染空质粒和TSPYL5质粒,培养48h后,收集细胞,进行免疫荧光技术检测,结果显示转染了TSPYL5的实验组较空质粒对照组总蛋白中β-catenin表达下调。在功能试验方面我们通过荧光素酶报告分析系统检测确定pcDNA-TSPYL5转染组较pc-DNA空白载体转染组的荧光素酶活性明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),表明转染真核表达载体pcDNA-TSPYL5可以抑制Wnt信号传导通路。我们还采用Western blotting检测TSPYL5转染前后AGS细胞总蛋白、胞浆蛋白及核蛋白β-catenin的表达,结果表明TSPYL5转染后AGS细胞的核内β-catenin的表达有明显下降,该结果进一步提示TSPYL5对Wnt通路具有抑制作用,作用的靶点可能在β-catenin结论:1. TSPYL5的表达下调与胃癌的发生发展有关。2. TSPYL5可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路中的关键分子β-catenin来抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活从而发挥其抑瘤作用。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-26
  1. 材料  12-14
  2. 方法  14-26
结果  26-35
  1. TSPYL5 在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达  26-29
  2. TSPYL5 在胃癌细胞株中的作用  29-30
  3. 在 Wnt/β-catenin 信号通路中 TSPYL5 的作用  30-35
分析与讨论  35-41
结论  41-42
参考文献  42-46
综述及参考文献  46-51
  参考文献  49-51
附录  51-55
攻读硕士学位期间公开发表的学术论文  55-56
致谢  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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