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不同治法方药对骨髓抑制小鼠的保护作用

作　者: 赵安斌
导　师: 李恩庆
学　校: 暨南大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 不同治法骨髓抑制细胞周期骨髓造血干细胞 TPO mRNA c-Mpl mRNA
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 76次
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内容摘要

目的：本研究通过观察补中益气汤、六味地黄汤、复方丹参饮对环磷酰胺造模的骨髓抑制小鼠骨髓造血干／祖细胞数目、骨髓造血干／祖细胞细胞周期以及脾脏促血小板生成素(thrombopoietin，TPO)mRNA、促血小板生成素受体(c-Mpl)mRNA表达水平的影响,从细胞和分子生物学水平探讨补肾、健脾、活血方药对环磷酰胺造模的骨髓抑制小鼠的骨髓造血功能保护作用的机制,为临床上肿瘤化疗后骨髓抑制病人提供用药依据。方法：100只小鼠完全随机分为5组,分别是正常对照组,模型对照组、六味地黄组、补中益气组、复方丹参组,每组各20只。从实验第1天开始,以0.2mL-10g-1的剂量给实验各组小鼠灌胃,正常对照组给予灌胃刺激,模型对照组灌服等量蒸馏水,六味地黄组、补中益气组、复方丹参组分别灌服相应的六味地黄汤、补中益气汤、复方丹参饮中药汤剂,灌胃由实验第1天开始至第28天结束。除正常组外,其余实验各组于第9、11、13天经腹腔注射环磷酰胺按100mg·kg-1剂量给药。分别于实验第14天和实验第28天分两批处死小鼠,每次每组处死10只。应用流式细胞术及实时荧光定量RT-PCR实验技术,观察骨髓有核细胞数、骨髓细胞增殖动力学、脾脏促血小板生成素mRNA以及促血小板生成素受体mRNA表达水平。结果：1.实验第14天,与正常对照组相比,模型对照组骨髓造血干／祖细胞数目显著降低,差异显著(P<0.01)；与模型对照组相比,六味地黄组与补中益气组骨髓造血干／祖细胞数目显著升高,差异显著。实验第28天,与正常对照组相比,模型对照组骨髓造血干／祖细胞数目显著降低,差异显著(P<0.05)；与模型对照组相比,六味地黄组与补中益气组骨髓造血干／祖细胞数目显著升高,差异显著。2.实验第14天,与正常对照组相比,模型对照组G1期细胞比例显著增加,S期与G2期细胞比例显著减少,差异均显著(P<0.05)；与模型对照组相比,六味地黄组与补中益气组G1期细胞比例显著减少,S期和G2期细胞比例显著增加,差异均显著。实验第28天,与正常对照组相比,模型对照组G1期细胞比例显著增加,S期与G2细胞比例显著减少,差异均显著(P<0.05)；与模型对照组相比,六味地黄组与补中益气组G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,差异无统计学意义,六味地黄汤组和补中益气汤组G2期细胞比例显著增加,差异显著(P<0.05)。3.实验第14天,与正常对照组相比,模型对照组TPO mRNA的表达水平显著降低,差异显著(P<0.01),模型对照组c-Mpl mRNA表达水平与正常组相比无明显差别；与模型对照组相比,六味地黄组与补中益气组的TPO mRNA和c-Mpl mRNA表达水平升高,差异显著。实验第28天,与正常对照组相比,模型对照组TPO mRNA的表达水平显著降低,差异显著(P<0.01),模型对照组c-Mpl mRNA表达水平与正常对照组相比无明显差别；与模型对照组相比,六味地黄与补中益气组的TPO mRNA和c-Mpl mRNA表达水平升高,差异显著。复方丹参饮对TPO mRNA和c-Mpl mRNA表达水平无明显调控作用。结论：1.六味地黄汤和补中益气汤可保护小鼠骨髓造血干／祖细胞,并能促进环磷酰胺造模后骨髓抑制小鼠造血干／祖的升高,进而促进造血干／祖细胞向外周血各系造血细胞的分化。2.六味地黄汤和补中益气汤能促进骨髓抑制小鼠骨髓造血干／祖细胞由G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,促进细胞通过G1／S期细胞周期阻滞,提高S期及G2／M期细胞比例,进而促进骨髓抑制小鼠外周血的恢复。推测六味地黄汤和补中益气汤均可促进静止期骨髓造血干／祖细胞进入细胞周期,进而促进造血细胞的增殖。3.六味地黄汤和补中益气汤可促进骨髓抑制小鼠脾脏促血小板生成素和促血小板生成素受体的基因表达,从基因水平上影响造血祖细胞对胞外刺激信号的应答,进而促进造血细胞的增殖。复方丹参饮对骨髓抑制小鼠脾脏促血小板生成素和促血小板生成素受体的基因表达无明显调控作用。

全文目录

主要缩略词中英文对照表  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-12
前言  12-15
第一部分不同治法对骨髓抑制小鼠骨髓造血干细胞数目及细胞周期的影响  15-26
  1 实验材料  15-16
    1.1 实验动物  15
    1.2 实验用药  15
    1.3 主要仪器  15-16
    1.4 主要试剂  16
  2 实验方法  16-19
    2.1 药物配制  16-17
    2.2 给药量的确定  17
    2.3 动物分组及给药方案  17-18
    2.4 骨髓抑制模型造摸方法  18
    2.5 样本采集方法  18
    2.6 检测步骤  18
    2.7 统计学处理  18-19
  3 结果  19-20
    3.1 不同治法方药对小鼠骨髓造血干/祖细胞数目的影响  19
    3.2 不同治法对骨髓抑制小鼠骨髓细胞细胞周期的影响  19-20
  4. 讨论  20-26
    4.1 模型的选择  20
    4.2 不同治法方药防治化疗骨髓抑制的理论依据  20-23
    4.3 不同治法对骨髓抑制小鼠的骨髓造血干/祖细胞数目的影响  23-24
    4.4 不同治法对骨髓抑制小鼠细胞周期的影响  24-26
第二部分不同治法对骨髓抑制小鼠脾脏TPO mRNA、c-Mpl mRNA表达水平的影响  26-40
  1 实验材料  26-27
    1.1 实验动物  26
    1.2 实验用药  26
    1.3 主要仪器  26
    1.4 主要试剂  26-27
  2 实验方法  27-30
    2.1 药物配制  27
    2.2 药液制备  27
    2.3 动物分组及给药方案  27-28
    2.4 骨髓抑制模型造摸方法  28
    2.5 样本采集方法  28
    2.6 RT-PCR方法  28-30
  3 结果  30-34
    3.1 不同治法对骨髓抑制小鼠脾脏TPO mRNA表达水平的影响  30-32
    3.2 不同治法对骨髓抑制小鼠脾脏c-Mpl mRNA表达水平的影响  32-34
  4 讨论  34-38
    4.1 不同治法对骨髓抑制小鼠脾脏TPO mRNA表达水平的影响  35-37
    4.2 不同治法对骨髓抑制小鼠脾脏c-Mpl mRNA表达水平的影响  37-38
  5 结论  38-40
参考文献  40-44
综述中医对肿瘤及对中医药对化疗后骨髓抑制的研究进展  44-54
附图一:实验第14天各组细胞周期图  54-55
附图二:实验第28天各组细胞周期图  55-56
附图三:流式细胞术检测骨髓CD34~+造血干细胞含量的变化  56-57
附图四:TPO测序结果图  57-60
附图五:β-actin测序结果  60-62
发表论文及参与课题  62-63
致谢  63

不同治法方药对骨髓抑制小鼠的保护作用

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