学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鸭源大肠杆菌ESBL_s的基因型检测

作　者: 李凤娟
导　师: 胡功政
学　校: 河南农业大学
专　业: 兽医药理学
关键词: 鸭大肠杆菌 ESBLS 基因型多重耐药
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 63次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)是一类由细菌质粒介导的,能水解氧亚氨基β-内酰胺类抗菌药如:头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松等三代头孢菌素和氨曲南等单环酰胺类抗菌药的β-内酰胺酶,可被β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸所抑制。ESBLS主要由革兰阴性菌,如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘质沙雷、变形杆菌等产生,是细菌对β-内酰胺类抗菌药产生耐药性的主要原因。已发现的ESBLS已经超过400多种,且新基因型种类在不断增加。按照Bradford的分类方法,ESBLS可分为TEM、CTX-M、SHV、OXA和其它五种类型。目前,随着大量抗菌药的使用,动物也出现了不同程度的耐药及多重耐药现象,其中菌株产ESBLS是耐药的重要原因之一。本文针对40株临床分离的鸭大肠杆菌,用CLSI推荐的ESBLS初筛、确证试验方法、双纸片协同法进行ESBLS检测,用标准微量两倍稀释法及K-B纸片法检测其对抗菌药的敏感性。利用分子生物学方法对临床分离产ESBLS大肠杆菌进行基因型、基因亚型的检测。检测结果表明,40株鸭大肠杆菌其中有18株菌产ESBLS,检出率为45%。药敏结果显示,临床分离菌株中除碳青酶烯类药物(亚胺培南)对产ESBLS菌株和非产ESBLS菌株均无影响,敏感率均为100%之外,产ESBLS大肠杆菌对其它21种抗菌药的耐药率为17%～100%,非产ESBLS的对这21种抗菌药的耐药率明显低于产ESBLS。多种抗菌药联合用药时,产ESBLS菌株MIC值均有大幅度降低。产ESBLs菌株除了对β-内酰胺类抗菌药产生耐药性外,对多种抗菌药表现出多重耐药性和交叉耐药性,例如氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素类。β-内酰胺类抗菌药与β-内酰胺酶抑制剂或其它类抗菌药联用均可明显提高产ESBLs菌对药物的抗菌活性。18株产ESBLS大肠杆菌分别用TEM、CTX-M、SHV、OXA型四对引物进行扩增,其中861bpTEM型为18株、905bpCTX-M型为12株、831bpOXA型为9株、SHV型引物未扩增出目的片段。同时携带有TEM和CTX-M的菌株为12株,携带TEM和OXA的菌株为9株,同时携带TEM、CTX-M和OXA的菌株为3株。PCR产物经克隆后测序,结果表明,TEM型临床分离菌之间的同源性为99.8%～100%,已提交序列FJ405215与GeneBank上公布AY293072(TEM-1)序列同源性为99.9%,核苷酸序列中有两个突变点,但没有引起氨基酸位点的突变,所以仍属于TEM-1型广谱酶。CTX-M型临床分离菌之间的同源性为99.9～100%,与已提交序列FJ405218、FJ405219与GeneBank上公布AF252622(CTX-M-14)、AY156923(CTX-M-27)序列同源性为100%,所以已提交两条序列分别为CTX-M-14、CTX-M-27。OXA型临床分离菌之间的同源性为100%,已提交序列FJ841897与GeneBank上公布的EF415651(OXA-1)序列同源性为100%,故已提交序列为OXA-1型ESBLs。

全文目录

致谢  5-8
摘要  8-9
1 文献综述  9-20
  1.1 超广谱β一内酰胺酶的起源  9
  1.2 ESBLs 的定义及分类  9-10
    1.2.1 ESBLs 的定义  9-10
    1.2.2 ESBLs 分类  10
  1.3 不同基因型ESBLs 的研究概况  10-13
    1.3.1 TEM 型 ESBLs  10-11
    1.3.2 SHV 型 ESBLs  11
    1.3.3 CTX-M 型 ESBLs  11-12
    1.3.4 OXA 型 ESBLs  12-13
    1.3.5 其它少见ESBLs 基因型  13
  1.4 ESBLs 的流行病学  13-15
  1.5 产ESBLs 菌株的耐药机制  15-16
    1.5.1 基因突变  15
    1.5.2 耐药基因的转移  15-16
  1.6 ESBLs 菌株的检测方法  16-19
  1.7 ESBLs 的治疗与预防  19-20
2 引言  20-21
3 材料和方法  21-29
  3.1 材料  21-23
  3.2 方法  23-26
  3.3 ESBLs 的基因型检测  26-27
    3.3.1 ESBLs 的引物设计  26
    3.3.2 模板DNA 的提取  26-27
    3.3.3 PCR 扩增  27
  3.4 PCR 产物的纯化、克隆  27-29
    3.4.1 PCR 产物的纯化  27-28
    3.4.2 目的片断的克隆  28
    3.4.3 阳性转化子的筛选与菌液 PCR 鉴定  28-29
    3.4.4 核苷酸序列测序及分析  29
4 结果与分析  29-42
  4.1 临床细菌分离鉴定结果  29
  4.2 临床分离菌 ESBLs 的检测结果  29-31
  4.3 细菌敏感性测定结果  31-36
    4.3.1 微量稀释法测定抗菌药物对鸭大肠杆菌的敏感性  31-34
    4.3.2 用 K-B 纸片法测定抗菌药物对鸭大肠杆菌的敏感性  34-36
  4.4 产 ESBLs 临床分离菌的 PCR 扩增结果  36-38
  4.5 测序结果及同源性比较结果  38-42
5 讨论与结论  42-48
  5.1 讨论  42-46
  5.2 结论  46-48
参考文献  48-58
英文摘要  58-59

鸭源大肠杆菌ESBL_s的基因型检测

内容摘要

全文目录

相似论文