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自发性高血压大鼠β_1AR基因甲基化表达差异的影响及血压相关性研究

作　者: 杜霞
导　师: 袁洪
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 高血压 β1-肾上腺素能受体 DNA甲基化基因
分类号: R544.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：1.检测基因型一致的自发性高血压大鼠心肌β1肾上腺素能受体(β1-Adrenergic Receptor,β1-AR)基因启动子区是否存在甲基化修饰,探讨该基因表达差异与甲基化的关系。2.探讨基因型一致的自发性高血压大鼠不同个体β1-AR表达差异与血压的关系。方法：1.取40只自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR),每天14：00-16：00监测血压水平,待血压稳定后记录收缩压并处死。2.采用基因测序方法验证SHRβ1-AR基因型是否一致；提取心肌组织DNA,采用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)及亚硫酸盐测序法检测β1-AR基因DNA甲基化修饰状态,根据甲基化有无将SHR分为甲基化组与非甲基化组,提取心肌组织RNA,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测β1-AR基因mRNA的表达；用Western blot检测β1-AR基因蛋白的表达,比较两组β1-AR基因表达差异。3.根据血压水平将SHR分为176-185mmHg组(A组)、186-195mmHg组(B组)、196-205mmHg组(C组)三组。分析三组血压与β1-AR基因表达的关系。结果：1.实验动物一般情况：共有40只SHR完成实验,收缩压、心率、身长、尾长、体重、心重均呈正态分布,各组SHR心率、身长、尾长、体重、心脏重量比较均无差异(P>0.05)。2.生物信息学分析结果：对SHRβ1-AR基因测序未检测到基因突变,基因型一致。甲基化分析显示大鼠β1-AR基因均存在CpG岛,MSP及亚硫酸盐测序结果表明SHRβ1-AR基因存在DNA甲基化修饰。3.甲基化对SHRβ1-AR表达影响：非甲基化组SHRβ1-AR mRNA表达量显著高于甲基化组(110.2±87.5vs.27.8±21.7,P<0.05),非甲基化组SHRβ1-AR蛋白表达量显著高于甲基化组(0.4±0.1vs.0.2±0.1,P<0.05)。4.血压与SHRβ1-AR表达关系：RT-PCR检测三组SHRβ1-AR mRNA的相对表达量为：A组为0.21±0.04,B组为0.27±0.02,C组为0.33±0.03；实时荧光定量PCR检测三组SHRβ1-AR mRNA的相对表达量为：A组为25.6±6.4；B组为67.0±15.5；C组为149.3±10.6。蛋白表达量为0.25±0.08、0.33±0.09、0.41±0.06,三组之间两两比较SHR心肌组织中β1-AR表达量不同,差异具有统计学意义(P<0.05)。回归分析说明SHR mRNA表达量可解释个体血压差异。结论：1.SHR心肌组织中β1-AR基因启动子区存在甲基化修饰,且甲基化修饰下调β1-AR基因mRNA.蛋白的表达。2.SHRβ1-AR表达存在差异,随着血压升高表达量增高。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
英文缩略词表  10-11
前言  11-13
第一章自发性高血压大鼠心肌组织β1-AR基因启动子区甲基化水平差异研究  13-26
  1.1 材料与方法  13-20
    1.1.1 材料  13-14
    1.1.2 方法  14-20
  1.2 结果  20-26
    1.2.1 SHR一般情况  20-21
    1.2.2 生物信息学分析结果  21
    1.2.3 SHR心肌组织β1-AR基因MSP及亚硫酸盐测序结果  21-22
    1.2.4 SHR心肌组织β1-AR基因甲基化修饰与表达差异的分析  22-25
    1.2.5 小结  25-26
第二章自发性高血压大鼠心肌组织中β1-AR表达与血压变异关系的研究  26-35
  2.1 材料与方法  26-29
    2.1.1 材料  26-27
    2.1.2 方法  27-29
  2.2 结果  29-35
    2.2.1 SHR一般情况  29-30
    2.2.2 三组SHRβ1-AR基因测序  30
    2.2.3 三组SHR心肌组织β1-AR基因表达差异  30-33
    2.2.4 SHR心肌组织β1-AR表达量、获得性因素与血压关联性预测  33-34
    2.2.5 小结  34-35
第三章讨论  35-39
  3.1 自发性高血压大鼠β1-AR表达与血压变异关系的研究  35-36
  3.2 自发性高血压大鼠β1-AR基因启动子区甲基化水平差异的研究  36-39
第四章结论  39-40
参考文献  40-46
综述  46-55
  参考文献  51-55
致谢  55-56
攻读硕士学位期间的研究成果  56

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