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MUC1靶向抗肿瘤载药纳米粒的构建及其效应的体外评估

作　者: 于琛琛
导　师: 杨先达；沈岩
学　校: 北京协和医学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: MUC1黏蛋白 肿瘤 核酸适配体 靶向给药系统
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


MUC1蛋白是一种存在于细胞膜表面的糖蛋白,在大多数腺癌细胞中过量表达’,是一个具有重要应用潜能的广谱肿瘤靶标分子。本课题采用能与MUC1蛋白特异性结合的核酸适配体(aptamer)作为靶向分子,以聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)为材料,构建了一种新型的具有MUC1靶向性的紫杉醇(PTX)纳米粒制剂,并检测了其基本特征。此外,我们以MUC1+的乳腺癌细胞MCF-7为实验组,MUC1-肝癌细胞HepG2为对照组,在体外初步检测了该纳米粒对MUC1+肿瘤细胞的靶向性及杀伤效率。主要研究工作如下：1.构建MUC1靶向载药纳米粒并测量其表征：采用超声乳化-溶剂挥发法制备包载紫杉醇的PLGA纳米粒,并用MUC1核酸适配体修饰纳米粒使其具有靶向性。激光粒度散射仪测定纳米粒的粒径,比色法测定载药纳米粒的包封率和连接效率,实验结果表明：MUC1靶向载药纳米粒粒径225.3±9.2 nm,药物包封率83.6±1.7%。2.检测肿瘤细胞对MUC1靶向纳米粒的摄入情况：流式细胞仪法证明MUC1核酸适配体通过共价键偶联到纳米粒表面后,对细胞的靶向性没有改变,在体外仍然可以特异性地结合MUC1+肿瘤细胞,并促进细胞摄入与其偶联的纳米粒。在激光共聚显微镜下观察到,被摄入的纳米粒分布在细胞质内。3.评估MUC1靶向载药纳米粒对肿瘤细胞的杀伤作用：用MTS法测定了不同形式的制剂(NP, PTX, NP-PTX, Apt-NP-PTX)对MUC1+细胞和MUC1-细胞的杀伤效率及IC50。实验结果表明,MUC1靶向载药纳米粒可显著提高(P<0.01)紫杉醇对MUC1+MCF-7细胞的杀伤作用,与非靶向载药纳米粒比较,细胞的生存率由84.47±5.47%降至61.77±3.72%,IC50值为由4.10μg/ml降低至1.52μg/ml。本课题首次将MUC1核酸适配体应用于靶向给药系统,构建的MUC1靶向性载药纳米粒性质稳定,运载抗肿瘤药物的效率较高,在体外可以特异性地结合MUC1+肿瘤细胞,并提高细胞对抗肿瘤药物的摄入,增强药物的杀伤作用,降低IC50值。因为MUC1蛋白在多种腺癌细胞中过量表达,提示这种新型的靶向载药纳米粒在治疗多种MUC1+肿瘤领域具有应用潜能。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-8
第一章 绪论  8-19
  1. 肿瘤的靶向治疗  8-9
  2. MUC1蛋白作为肿瘤治疗的靶标分子  9-10
  3. 核酸适配体作为肿瘤治疗的靶向分子  10-16
  4. 选题依据及研究意义  16-17
  5. 研究策略和技术路线  17-19
    5.1 拟解决的科学问题  17
    5.2 研究策略  17-18
    5.3 技术路线  18-19
第二章 MUC1靶向载药纳米粒的构建  19-29
  背景  19-20
  1. 材料与方法  20-23
    1.1 实验材料  20
      1.1.1 化学试剂和材料  20
      1.1.2 主要仪器和设备  20
      1.1.3 软件  20
    1.2 实验方法  20-23
      1.2.1 纳米粒的制备  20-21
      1.2.2 偶联MUC1核酸适配体S2.2  21
      1.2.3 检验核酸适配体与纳米粒的偶联方式  21
      1.2.4 核酸适配体偶联效率的测定  21-22
      1.2.5 MUC1靶向纳米粒粒径的测定  22
      1.2.6 各种缓冲溶液的配制  22
      1.2.7 紫杉醇吸光值-浓度标准曲线的测定  22
      1.2.8 载药纳米粒包封率的测定  22-23
      1.2.9 MUC1靶向载药纳米粒的体外释放  23
  2. 实验结果与讨论  23-29
    2.1 MUC1靶向纳米粒的制备及基本表征  23-25
    2.2 偶联MUC1核酸适配体  25-26
    2.3 紫杉醇标准曲线的测定  26-28
    2.4 紫杉醇的体外释放  28-29
第三章 MUC1靶向纳米粒对MUC1~+肿瘤细胞的选择性  29-36
  背景  29
  1. 实验材料和方法  29-31
    1.1 实验材料  29-30
      1.1.1 主要试剂和材料  29-30
      1.1.2 细胞培养  30
      1.1.3 主要仪器和设备  30
    1.2 实验方法  30-31
      1.2.1 MCF-7细胞和HepG2细胞培养  30
      1.2.2 MUC1核酸适配体选择性结合细胞  30-31
      1.2.3 激光共聚焦显微镜观察MCF-7细胞对载药纳米粒的摄取  31
      1.2.4 肿瘤细胞对纳米粒的摄入  31
  2. 实验结果与讨论  31-36
    2.1 MUC1核酸适配体选择性结合细胞  31-33
    2.2 载药MUC1-纳米粒体外选择性测定  33-34
    2.3 激光共聚焦显微镜观察MCF-7细胞对载药纳米粒的摄取  34-36
第四章 MUC1靶向载药纳米粒在体外的选择性杀伤作用  36-42
  背景  36-37
  1. 实验材料和方法  37-38
    1.1 实验材料  37
      1.1.1 主要试剂和材料  37
      1.1.2 主要仪器和设备  37
    1.2 实验方法  37-38
      1.2.2 载药MUC1-纳米粒体外杀伤实验  37
      1.2.3 IC_(50)的测定  37-38
  2. 实验结果与讨论  38-42
    2.1 载药MUC1-纳米粒体外杀伤实验  38-40
    2.2 IC_(50)的测定  40-42
第五章 讨论和结论  42-44
  一 讨论  42-43
  二.结论  43-44
参考文献  44-49
非论文综述  49-56
  参考文献  54-56
致谢  56-57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤治疗学
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