学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

转录因子Klf4对小鼠Dppa2基因调控作用的初步研究

作　者: 赵谦
导　师: 杜娟
学　校: 中南大学
专　业: 遗传学
关键词: 成骨不全 基因突变 COL1A1 多态性 小鼠胚胎干细胞 Dppa2 Klf4 RNA干扰 转录调控
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 61次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


第一部分1例新发成骨不全的突变鉴定及多态性筛查成骨不全(Osteogenesis imperfecta,01)是一种结缔组织疾病,其特点是不同程度的骨质脆弱,常伴随身材矮小、蓝巩膜、听力丧失、牙本质发育不全、韧带及皮肤高度松弛等。成骨不全在全球范围内的发病率约为1/10,000-1/15,000。Ⅰ型胶原蛋白是机体纤维胶原的主要组成部分,占据了哺乳动物四分之一的体重。它主要存在于骨骼、骨膜、皮肤、韧带、血管、巩膜和角膜组织。若Ⅰ型胶原蛋白中的连续的三螺旋结构出现缺陷,则导致成骨不全。大多数成骨不全的病例是由于COL1A1或COL1A1基因发生突变所导致的,这两个基因分别编码Ⅰ型胶原蛋白的前α-1链和前α-2链。为了鉴定一家系中新发成骨不全病人的基因突变,我们应用PCR-DHPLC-DNA测序的基因诊断策略,发现在该病人COL1A1基因第36号外显子内存在一个杂合突变2461(2461 G>A),导致原来的甘氨酸突变为丝氨酸(G821S)。多态性筛查排除该突变为多态的可能,因此,该突变很可能导致成骨不全。Dppa2 (Developmental Pluripotency-Associated gene 2)是近几年发现的在多能性细胞及某些癌组织中特异性表达的基因,与胚胎干细胞(ESCs)的多能性维持和自我更新有关,其表达抑制引起ESCs的分化。Klf4在体细胞重编程为诱导性多能干细胞(iPS)的过程中发挥了重要作用,其在胚胎发育进程中的调控作用引起世人的广泛关注。先前的研究证明Dppa2可能作为Oct4的靶基因参与到ESCs多能性维持和自我更新的调控网络中来。本课题借助生物信息学分析以小鼠胚胎干细胞(mESCs)为材料,探索转录因子Klf4的表达变化对Dppa2表达的影响。通过生物信息学分析,发现在Dppa2基因启动子区存在4个Klf4的转录因子结合位点,推测Dppa2作为Klf4的靶基因参与ESCs不分化状态的维持和自我更新。我们首先以mESCs的cDNA为模板,利用PCR获得Klf4的开放阅读框(ORF),并将其克隆入真核细胞表达载体pCMV-myc中去,经过PCR、DNA测序等鉴定构建成功。接着我们利用PLKO.1载体构建了针对小鼠K1f4基因的RNA干扰(RNAi)载体,同样经过测序证明构建成功。为了鉴定干扰效果,我们向人的293T细胞(不表达小鼠Klf4基因)中,分别单独转染pCMV-myc-Klf4质粒,以及共转过表达质粒和干扰质粒,并以未处理的293T细胞作为对照。通过RT-PCR、Realtime PCR、Western Blot等检测发现：单独转染Klf4真核表达质粒的293T细胞中可以检测到K1f4的高表达,而两种质粒共转和未处理的293T细胞中几乎检测不到该基因的表达,可见Klf4的真核表达载体、以及针对小鼠Klf4基因的RNAi载体均可发挥作用。最后,我们利用mESCs为材料,分别将针对小鼠Klf4基因的过表达质粒和RNAi载体瞬时转染,并检测Dppa2的表达。发现抑制Klf4的表达后,Dppa2的表达出现相应的下调。本课题初步证实Klf4的表达变化对Dppa2的表达有影响。尚需通过Chip和EMSA等实验证实其在体内外的确存在结合。

全文目录


摘要  4-7
Abstract  7-11
中英文缩略词  11-13
第一部分 1例新发成骨不全的突变鉴定及多态性筛查  13-30
  前言  14-15
  实验技术路线  15-16
  1 研究对象与实验材料  16-18
  2 实验方法  18-22
  3 结果  22-26
  4 讨论  26-28
  5 结论  28-29
  参考文献  29-30
第二部分 转录因子Klf4对小鼠Dppa2基因转录调控作用的初步研究  30-67
  技术路线图  31-32
  前言  32-35
  第一章 材料与方法  35-52
  第二章 实验结果  52-58
  第三章 讨论  58-63
  第四章 结论  63-64
  参考文献  64-67
综述 DPPA2基因的研究进展  67-76
  参考文献  73-76
致谢  76

相似论文

  1. 多转录因子组合调控研究,Q78
  2. 缺血性脑血管病患者CYP2C19基因多态性分析,R743
  3. 猪BMP7基因启动子多态性及其与繁殖性状关联性分析,S828
  4. 猪BMP7基因外显子和内含子多态性检测及其与繁殖性状关系的研究,S828
  5. 湖羊BMP4基因克隆、表达与多态性分析,S826
  6. 甜菜夜蛾信息素结合蛋白的表达动态及其受交配和钟基因沉默的影响,S433.4
  7. 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰,S435.622.3
  8. 铁皮石斛叶绿体微卫星的开发应用及其种间通用性研究,S567.239
  9. 鸡CFL2基因遗传变异及其效应与表达的研究,S831
  10. 水稻胁迫应答基因3’UTR模体及相关miRNA的生物信息学研究,Q943.2
  11. 霍乱弧菌LysR/MFS调控体系的功能研究,R378
  12. 瓜类细菌性果斑病菌hrp基因簇部分基因的克隆及功能研究,S436.5
  13. 瓜类细菌性果斑病菌致病相关基因筛选及luxR基因功能分析,S436.5
  14. 马铃薯甲虫脯氨酸脱氢酶基因的克隆、表达分析及其dsRNA的发酵生产,S435.32
  15. 几种新型杀虫剂对马铃薯甲虫的毒力及两类靶标的分子克隆,S435.32
  16. 太湖猪卵巢组织FSHR基因表达水平与5’调控区多态性分析,S828
  17. 家畜布鲁氏菌病流行病学调查及布鲁氏菌单核苷酸多态性分子分型研究,S855.12
  18. 慢病毒载体介导的RNAi特异性沉默猪Myostatin基因的研究,S828
  19. 霍乱弧菌LysR家族基因vc2103的功能及其调控基因的研究,R346
  20. MTRR基因A66G多态性及血浆同型半胱氨酸水平与心肌梗死的关系,R542.22
  21. MCFP对肝癌细胞生物行为学影响初步研究,R735.7

中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 分子遗传学
© 2012 www.xueweilunwen.com