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霍乱弧菌LysR家族基因vc2103的功能及其调控基因的研究

作　者: 金晶
导　师: 朱军
学　校: 南京农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 霍乱弧菌 LysR转录调控家族 vc2103 利福平胞壁质水解酶
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

霍乱是一种古老且流行广泛的急性肠道感染疾病,革兰氏阴性细菌霍乱弧菌是引起霍乱的病原细菌。大量的研究表明,霍乱弧菌的致病能力主要是由霍乱毒素和毒素共调节菌毛引起的。LysR转录调控家族是一类被深入研究的转录调控因子,高度保守且普遍存在于细菌各种属中,组成了已知原核生物中最大的DNA结合蛋白家族,它所调控的目标基因也多样,在生物代谢,细胞分裂,群体感应,毒力,游动性,固氮,毒素产生,黏附及分泌等方面都发现有LysR型转录调节蛋白的参与。其中大部分的LysR基因具有分支状的启动子,并且通过这种结构在激活其目标基因转录表达的同时抑制自身的转录。借助于生物信息学知识,我们发现霍乱弧菌中约有40个LysR型蛋白。本实验以霍乱弧菌LysR家族基因vc2103作为研究对象。首先通过构建冷光检测菌株研究vc2103的调控模式,研究发现：LysR家族基因vc2103不但可以抑制自身的表达而且还可以在醋酸的诱导下激活基因vc2101(胞壁质水解酶调控因子)的表达。通过框内敲除的方法分别构建vc2103缺失菌株以及vc2100和vc2101缺失的菌株。研究发现vc2103缺失以及vc2100和vc2101缺失并不影响霍乱弧菌的生长,但是在醋酸存在的情况下,野生型菌株和vc2103缺失的菌株在菌株生长的中后期较未加醋酸的衰亡快;通过Western blot以及乳鼠肠道定殖实验结果表明：vc2103缺失后霍乱弧菌毒力基因的表达以及定殖能力并没有受到影响,说明vc2103与霍乱弧菌的毒力没有关系；在醋酸存在情况下,野生型菌株和vc2103缺失的菌株较无醋酸的时候对利福平的抗性有所降低。当vc2103下游基因vc2100和vc2101缺失后,突变株对利福平的抗性较野生型菌株显著的增强,在醋酸存在情况下,野生型菌株较无醋酸的时候对利福平的抗性降低,但vc2100和vc2101缺失突变株对利福平的敏感性没有太大的差异,结果表明vc2100和vc2101能够降低菌株对利福平的抗性；通过对细胞外的胞壁质水解酶表达情况的检测,实验结果初步显示vc2100和vc2101的缺失会影响细胞外的胞壁质水解酶的正常表达。

全文目录

摘要 5-6ABSTRACT 6-8文献综述 8-28 一、总论 8-10 二、霍乱弧菌的致病性 10-14 三、霍乱弧菌的群体感应 14-17 四、LysR家族转录因子 17-22 五、胞壁质水解酶(murein hydrolases) 22-23 参考文献 23-28第一章霍乱弧菌LysR家族蛋白的调控方式 28-52 1. 实验材料 28-31 2. 实验方法 31-38 3 结果和分析 38-49 4. 小结与讨论 49-51 参考文献 51-52第二章霍乱弧菌lysR缺失菌株生理功能的研究 52-62 1. 材料与方法 53-56 2. 结果与分析 56-59 3 小结与讨论 59-60 参考文献 60-62第三章霍乱弧菌lysR下游基因缺失菌株生理功能的研究 62-70 1. 实验材料 62-63 2. 实验方法 63-65 3. 结果与分析 65-67 4. 小结与讨论 67-68 参考文献 68-70全文总结 70-72附录一文中所用缩写 72-73附录二文中所用的试剂和培养基配方 73-76致谢 76

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