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携带白蛋白启动子和IDO基因的重组腺病毒载体的构建

作　者: 白燕南
导　师: 王耀东
学　校: 福建医科大学
专　业: 外科学
关键词: IDO 白蛋白启动子腺病毒
分类号: R392.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 47次
引　用: 1次
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内容摘要

【目的】构建携带小鼠白蛋白启动子和IDO基因的重组腺病毒载体,研究其在肝脏Hepa 1-6细胞的转录水平及蛋白表达情况。【方法】按照引物设计的基本原则设计白蛋白启动子引物,人工合成白蛋白启动子,亚克隆至没有启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack的XbaI/HindIII酶切位点,构建携带有小鼠白蛋白启动子的pAdTrack-PmALB载体;酶切含有小鼠全长IDOcDNA的PCOUS-2质粒,亚克隆至穿梭载体pAdTrack-PmALB、pAdTrack-CMV上的XhoI/EcoRV酶切位点,在BJ5183细菌中和AdEasy-1进行同源重组,生成并筛选含有目的基因的腺病毒骨架质粒pAdEasy-CMV/mIDO和pAdEasy-malb/mIDO的阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,脂质体法转染AD-293细胞进行包装,扩增,检测病毒滴度,RT-PCR和荧光显微镜鉴定和检测重组腺病毒转染AD-293细胞后IDO的表达。将含有目的基因mIDO的病毒转染Hepa 1-6细胞,RT-PCR和Western Blot法分别检测Hepa 1-6细胞中mIDO基因和蛋白表达。【结果】经酶切及测序证实携带白蛋白启动子和IDO基因重组腺病毒载体构建成功,RT-PCR检测到转染后AD-293细胞内IDO的表达,病毒感染滴度为2.9×106 pfu/ml,并且能够感染Hepa 1-6细胞,RT-PCR和Western Blot可以检测到IDO在Hepa 1-6细胞内表达。【结论】成功构建了携带白蛋白启动子和小鼠IDO基因的重组腺病毒载体,能够感染Hepa 1-6细胞并在转录和蛋白水平表达,为探讨IDO的生物学功能奠定了基础。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
材料与方法  11-28
结果  28-34
附图  34-40
讨论  40-43
结论  43-44
参考文献  44-48
综述  48-56
  综述参考文献  53-56
致谢  56

携带白蛋白启动子和IDO基因的重组腺病毒载体的构建

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