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高效分泌表达内皮抑素的腺病毒载体研究

作　者: 范凌云
导　师: 李荣秀；谢庆军
学　校: 上海交通大学
专　业: 生物工程
关键词: 人内皮抑素腺病毒载体分泌表达信号肽
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的本研究以IL-2基因信号肽编码序列为基础,对其进行了不同的修饰优化,并比较其在腺病毒载体中介导人内皮抑素分泌表达的能力,筛选出一种高效介导人内皮抑素基因分泌表达的腺病毒载体,为开发长效、稳定、低副作用的内皮抑素-腺病毒载体抗肿瘤基因治疗药物奠定基础。方法1、分别获得野生型IL-2信号肽、优化型IL-2信号肽、Kozak序列+野生型IL-2信号肽、Kozak序列+优化型IL-2信号肽四种信号肽引导的Endo基因(IwE、ImE、KIwE、KImE);2、分别构建用于共转染的四种重组质粒pDC315(io)-IwE、pDC315(io)-ImE、pDC315(io)-KIwE、pDC315(io)-KImE;3、利用“HI-IQ”系统重组得到四种重组腺病毒rAd-IwE、rAd-ImE、rAd-KIwE、rAd-KImE,并扩增、纯化和测定滴度;4、四种重组腺病毒载体在NCI-H460细胞中的表达及表达水平的分析比较。结果1、获得了四种信号肽引导的Endo基因;2、构建了用于转染的四种重组质粒pDC315(io)-IwE、pDC315(io)-ImE、pDC315(io)-KIwE、pDC315(io)-KImE;3、得到rAd-IwE、rAd-ImE、rAd-KIwE、rAd-KImE四种重组腺病毒,测定滴度依次是3.9×10~8、3.7×10~8、3.1×10~8、3.5×10~8;4、分析比较得到Ad-ImE、Ad-KImE两种能高效介导分泌表达Endo的重组腺病毒载体,最高表达量比Ad-IwE高分别为3倍、4倍。结论我们获得了能较高效介导内皮抑素分泌表达的重组腺病毒载体。

高效分泌表达内皮抑素的腺病毒载体研究

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