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Bmi-1沉默对神经干细胞增殖的影响及其作用机制

作　者: 吉慧军
导　师: 孙鹏
学　校: 青岛大学
专　业: 神经外科
关键词: BMI-1 RNA干扰 P16INK4a 神经干细胞纹状体
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:Bmi-1是一种属于PcG家族的原癌基因,它直接参与细胞生长、增殖的调节,是干细胞自我更新所必需的。利用Bmi-1与绿色荧光蛋白（GFP）共表达的慢病毒载体转染神经干细胞,观察Bmi-1在神经干细胞中的表达量变化及对可能的下游基因表达的影响,探讨其与神经干细胞增殖的关系。方法:实验组分为三组,空白对照组、空载体对照组及实验组（转染7天）,利用Bmi-1基因和绿色荧光蛋白（GFP）共表达的慢病毒载体转染人胚胎纹状体神经干细胞,观察转染前后细胞的增殖能力及细胞衰老的变化,同时应用实时定量PCR检测转染前后神经干细胞中Bmi-1及P16^INK4a等下游基因表达的变化。结果:①空白对照组的克隆形成率是7.6%±0.2%,bmi-1-shRNA实验组的是1.4%±0.3%（p＜0.05）;空白对照组Brdu插入率是44.4%±9.3%,bmi-1-shRNA实验组的是14.1%±6.7%（p＜0.05）;②转染Bmi-1慢病毒载体的神经干细胞衰老加快;③实时定量PCR检测显示,Bmi-1mRNA在转染7天后神经干细胞中Bmi-1表达量下降为对照组的45%,而P16^INK4a基因的表达量较对照组升高10-12倍（p＜0.05）。结论:①缺乏Bmi-1 mRNA的神经干细胞增殖减慢,衰老加快。②Bmi-1 shRNA干扰载体可以有效下调神经干细胞中Bmi-1 mRNA的表达。③Bmi-1是维持神经干细胞自我更新的关键因子

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-7
第一章材料与方法  7-9
  1.1 主要试剂  7
  1.2 细胞  7
  1.3 主要仪器  7-9
第二章实验方法  9-13
  2.1 细胞培养、转染  9
  2.2 BrdU渗入实验检测细胞的增殖能力  9-10
  2.3 细胞克隆试验  10
  2.4 细胞衰老染色  10
  2.5 实时荧光定量RT-PCR检测转染Bmi-1 shRNA前后7天各组mRNA的表达变化  10-12
    2.5.1 总RNA提取  10-11
    2.5.2 cDNA合成  11
    2.5.3 实时荧光定量PCR反应检测mRNA表达  11-12
  2.6 图像图理与数据分析  12-13
第三章实验结果  13-19
  3.1 Bmi-1 shRNA转染神经干细胞前后增殖能力比较  13-15
    3.1.1 神经干细胞转染前后细胞克隆能力  13-14
    3.1.2 转染前后神经干细胞Brdu插入率比较  14-15
  3.2 转染前后神经干细胞衰老染色  15-17
  3.3 转染前后神经干细胞中Bmi-1基因表达和P16~(INK4a)的mRNA表达  17-19
第四章讨论  19-21
结论  21-22
参考文献  22-34
攻读学位期间发表文章情况  34-35
致谢  35-37

Bmi-1沉默对神经干细胞增殖的影响及其作用机制

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