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大鼠脑积水侧脑室周围神经干细胞的实验研究

作　者: 董安石
导　师: 吴春明
学　校: 大连医科大学
专　业: 外科学
关键词: 大鼠脑积水动物模型神经干细胞
分类号: R742.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:枕大池内注射高岭土法建立大鼠交通性脑积水模型及通过观察大鼠侧脑室周围神经干细胞的变化,探讨其病理生理过程和修复机制,为寻找治疗交通性脑积水提供新的治疗方法和恰当的治疗时机提供理论依据。方法: 70只6周健康Wistar大鼠随机分为对照组和实验组各35只,对照组和实验组均再分为A(3天)、B(1周)、C(2周)、D(3周)、E(4周) 5个亚组。实验组大鼠麻醉满意后固定备皮、消毒,头置于木板斜坡上,暴露头颈交界处。切开皮肤,钝性分离肌肉暴露寰枕筋膜。微型注射器穿刺寰枕筋膜出现落空感后立即停止进针,缓慢抽出无色澄清脑脊液0.05 ml,然后向枕大池内缓慢注射250mg/ml无菌高岭土混悬液0.05ml,医用耳脑胶封闭针眼,缝合切口,维持头低位15-20分钟。对照组大鼠相同位置抽出无色澄清脑脊液0.05 ml后注射相同体积的无菌生理盐水。分别于注射高岭土、生理盐水后3天、1周、2周、3周、4周行头MRI筛选出满意的动物模型,并于当天麻醉后打开胸腔、暴露心脏、夹闭胸主动脉及下腔静脉,医用输血器针头沿心尖插入升主动脉,剪开右心耳。用生理盐水进行快速心脏灌洗至右心耳流出无色澄清液体后改用4%多聚甲醛快速灌注至双上肢出现细微震颤,双上肢僵硬,颈部僵硬。行断头取脑,将脑组织放至4%多聚甲醛后固定12小时,依次20%、30%蔗糖梯度脱水各1天,直至脑组织完全沉底。将组织用OCT胶包埋,放置液氮表面速冻20秒钟,放入-30℃恒温冰冻切片机切片,片厚为10微米。应用免疫组织化学方法染色,观察大鼠侧脑室周围nestin阳性细胞形态分布及变化。结果:实验组28只大鼠成功诱发脑积水并完成实验过程,对照组30只大鼠完成整个实验过程。对照组大鼠侧脑室无明显扩大,各对应时间点侧脑室指数大致相同,P>0.05。差别无统计学意义。实验组大鼠脑室随时间延长进行性扩大,与对照组各时间点比较P<0.01,差异具有统计学意义。对照组侧脑室周围nestin阳性细胞数平均193±20.3并维持,各对应时间点之间差异无统计学意义。脑积水造模后,侧脑室周围nestin阳性细胞数目3天达到最大值,为对照组的(308±1)%(P<0.001)。1周后脑室周围nestin阳性细胞数下降至对照组的(196±1)%;2周后下降至对照组水平210±22.4,P>0.05;3周后侧脑室周围几乎看不到nestin阳性细胞。结论:枕大池内注入高岭土法可成功制作出交通性脑积水动物模型,可用于脑积水疾病的实验研究。侧脑室周围神经干细胞数目在脑积水早期迅速达到高峰并随着时间变化逐渐下降直至消失。考虑可能与侧脑室机械性扩张压迫周围组织引起缺血、缺氧有关。神经干细胞参与了脑积水病理生理变化及修复过程。

全文目录

一、摘要 5-9 （一）中文摘要 5-7 （二）英文摘要 7-9二、正文 9-27 （一）前言 9-10 （二）材料与方法 10-14 （三）结果 14-19 （四）讨论 19-24 （五）结论 24-25 （六）参考文献 25-27三、文献综述 27-35 （一）正文 27-32 （二）参考文献 32-35四、致谢 35

大鼠脑积水侧脑室周围神经干细胞的实验研究

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