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鸡精液冷冻稀释液筛选和冷冻程序的研究

作　者: 王世银
导　师: 张兆旺
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 鸡 精液 冷冻稀释液 抗冻剂 冷冻程序
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


本论文从冷冻稀释液的筛选、优化和冷冻程序几个方面对鸡精液冷冻技术进行了研究。对于稀释液的筛选,本文先设计了8个冷冻稀释液基础液,分别进行大量的冷冻试验,最终筛选出一个冷冻效果较好的稀释液基础液,然后再对该基础液从渗透压,抗冻剂种类及添加浓度,卵黄、咖啡因和维生素E等物质的添加等方面进行了较为系统的优化,得到了一个冷冻效果较好的稀释液。然后又对影响精液冷冻效果的另一个因素——冷冻工艺从降温速度,平衡时间和冷冻剂型等方面进行了研究,确定了一个较为合理的冷冻程序。具体的试验结果如下:1.渗透压为422mOsm,pH为6.48的1号稀释液基础液冷冻效果最好,精子冻后活力达到0.72,精子复苏率达90.0%,存活时间达60min,极显著地高于其它液体。2.渗透压为420mOsm时精子的冻后活力、复苏率和存活时间分别为0.70、87.5%和75min,均极显著地高于渗透压为330mOsm、360mOsm、390mOsm、400mOsm、440mOsm时的冻后活力和复苏率(p<0.01)。3.鸡精液冷冻时的最佳抗冻剂为浓度为6%的甘油,其次为浓度为6%的DMSO,最后为浓度为10%的DMA和浓度为4%的乙二醇。联合抗冻剂冷冻效果与单一抗冻剂差异不显著。4.添加10%的卵黄、5mmol/L的咖啡因和15mg/mL的维生素E可显著地提高精子的冻后活力和复苏率。5.在鸡精液冷冻时,降温速度控制在0.55℃/min,在4℃下平衡120min冷冻效果较好。6.冷冻剂型以颗粒冻精为好。7.鸡冷冻精液的解冻以干解冻效果较好,一次解冻的精液颗粒数应尽可能少。8.高温解冻的解冻效果优于温水解冻(30℃～40℃)和低温冰水解冻(0℃～5℃),本试验中采用70℃高温解冻效果较好。9.采用离心去除甘油时,离心速度应控制在800rpm为宜。

全文目录


摘要  2-3
Summary  3-7
第一章 文献综述  7-25
  前言  7-8
  一、精液冷冻保存技术研究进展  8-9
    1. 精液冷冻保存研究意义  8
    2. 精液冷冻保存研究概况  8-9
  二、家禽精液冷冻保存技术研究进展  9-13
    1. 家禽精液冷冻保存技术研究的沿革  9-10
    2. 家禽精液的理化特性、化学组成和精子的形态结构特点  10-11
      2.1 家禽精液的理化特性和化学组成  10-11
      2.2 精子的形态结构特点  11
    3. 禽类品系和个体在抗冻性上的差异和冷冻精液的遗传特性  11-12
    4. 母禽繁殖生理特点  12-13
  三、鸡精液冷冻的基本原理与方法  13-15
    1. 冷冻原理  13-14
    2. 冷冻方法  14-15
      2.1 颗粒精液冷冻技术  14-15
      2.2 PCR 管精液冷冻技术  15
      2.3 离心管精液冷冻技术  15
  四、影响鸡精液冷冻效果的因素  15-23
    1. 稀释液  15-17
    2. 抗冻剂  17-19
      2.1 甘油  17-19
      2.2 其他防冻剂  19
    3. 平衡时间、冷冻速度和解冻温度  19-21
      3.1 平衡时间  19-20
      3.2 冷冻速率  20-21
      3.3 解冻温度  21
    4. 冷冻、解冻对精子受精能力和结构、代谢的影响  21-23
      4.1 冷冻解冻后精子受精力的变化  21-22
      4.2 冷冻解冻对精子结构和代谢的影响  22-23
  五、鸡的冷冻精液人工授精概况  23-25
    1. 鸡冷冻精液解冻方法  23-24
    2. 母鸡的授精技术  24-25
      2.1 授精方法  24
      2.2 授精操作的技术要点  24-25
第二章 试验部分  25-52
  试验一 鸡精液冷冻稀释液基础液的筛选  25-32
    一、引言  25
    二、材料与方法  25-28
      1. 试验材料  25-26
        1.1 试验动物  25
        1.2 主要试剂  25-26
        1.3 主要仪器  26
      2. 方法  26-28
        2.1 基础液的筛选  26-27
          2.1.1 试验动物的饲养管理  26
          2.1.2 稀释液的配制  26-27
          2.1.3 采精  27
          2.1.4 稀释与平衡  27
          2.1.5 冷冻  27
          2.1.6 解冻与镜检  27
          2.1.7 数据处理  27
        2.2 基础液的优化  27-28
    三、结果与分析  28-29
      1. 基础液的筛选  28
      2. 基础液的优化  28-29
    四、讨论  29-31
      1. 基础液的筛选  29-30
      2. 基础液的优化  30-31
    五、小结  31-32
  试验二 添加7 种冷冻保护剂对鸡精子冷冻效果的影响  32-42
    一、引言  32
    二、材料与方法  32-34
      1. 试验材料  32
        1.1 试验动物  32
        1.2 主要试剂  32
        1.3 主要仪器  32
      2. 方法  32-34
        2.1 不同抗冻剂及其浓度对鸡精液冷冻的影响  33
        2.2 鸡卵黄对鸡精液冷冻的影响  33
        2.3 咖啡因和维生素E 对鸡精液冷冻的影响  33-34
        2.4 冷冻及解冻程序  34
        2.5 数据处理  34
    三、结果与分析  34-38
      1. 不同抗冻剂及其浓度对鸡精液冷冻的影响  34-36
        1.1 单一抗冻剂对鸡精液冷冻的影响  34-35
        1.2 联合抗冻剂对鸡精液冷冻的影响  35-36
      3. 鸡卵黄对鸡精液冷冻的影响  36-37
      4. 咖啡因和维生素E 对鸡精液冷冻的影响  37-38
    四、讨论  38-41
      1. 抗冻剂及其浓度对鸡精液冷冻的影响  38-39
      2. 鸡卵黄对鸡精液冷冻的影响  39-40
      3. 咖啡因和维生素E 对鸡精液冷冻的影响  40-41
    五、小结  41-42
  试验三 鸡精液冷冻保存程序的优化  42-52
    一、引言  42
    二、材料与方法  42-44
      1. 试验材料  42
      2. 主要试验方法  42-44
        2.1 降温时间和平衡时间的优化  42-43
        2.2 不同冷冻剂型对冷冻效果的影响  43
        2.3 不同解冻方法和放入的颗粒数对冷冻效果的影响  43
        2.4 不同解冻温度对解冻效果的影响  43
        2.5 解冻后离心去甘油对冷冻效果的影响  43-44
    三、结果与分析  44-48
      1. 不同降温时间和平衡时间对鸡精液冷冻的影响  44-45
      2. 不同冷冻剂型对鸡精液冷冻的影响  45
      3. 不同解冻方法和放入的颗粒数对解冻效果的影响  45-47
      4. 不同解冻温度对解冻效果的影响  47
      5. 解冻后离心去甘油对冷冻效果的影响  47-48
    四、讨论  48-51
      1. 降温时间和平衡时间对鸡精液冷冻的影响  48-49
      2. 不同冷冻剂型对鸡精液冷冻的影响  49
      3. 不同解冻方法和放入的颗粒数对解冻效果的影响  49-50
      4. 不同解冻温度对解冻效果的影响  50-51
      5. 解冻后离心去甘油对冷冻效果的影响  51
    五、小结  51-52
结论  52-53
致谢  53-54
参考文献  54-57
作者简介  57-58
导师简介  58-60

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家禽 > 鸡
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