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应用酵母双杂交系统对PrP蛋白与Shadoo蛋白互作的研究

作　者: 郝镯
导　师: 沈景林
学　校: 吉林大学
专　业: 草业科学
关键词: 阮蛋白酵母双杂交自激活互作
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本课题通过扩增小鼠朊蛋白开放阅读框(PrP23-231)中十二段不同长度的基因片段，分别构建酵母双杂交诱饵质粒pSos-PrP(23-216)、pSos-PrP(23-198)、pSos-PrP(23-192)、pSos-PrP(23-178)、pSos-PrP(23-163)、pSos-PrP(23-159)、pSos-PrP(23-153)、pSos-PrP(23-142)、pSos-PrP(23-130)、pSos-PrP(23-126)、pSos-PrP(23-108)、pSos-PrP(23-90)等十二个重组质粒，检测诱饵质粒在酵母细胞质中的自激活作用及定位情况，结果证明此十二个诱饵质粒无自激活作用可以应用于CytoTrap酵母双杂交系统；扩增Shadoo(简写为SHo)蛋白开放阅读框(SPRN25-125)五段不同长度的基因片段，构建pMyr-SHo(25-61)、pMyr-SHo(25-77)、pMyr-SHo(25-85)、pMyr-SHo(25-100)、pMyr-SHo(25-111)等五个猎物质粒，利用Stratagene CytoTrap酵母双杂交系统，通过共转化实验，初步筛选到pSos-PrP(23-126)与pMyr-SHo(25-77)能够发生相互作用；构建PCMV-MYC-PrP及PCMV-HA-Sho真核表达载体，在293细胞中进行免疫共沉淀实验，进一步验证PrP(23-126)与SHo(25-77)的互作效应，最终确定，PrP与Shadoo蛋白是互作蛋白。

全文目录

内容提要  5-8
英文缩写词表  8-9
前言  9-12
第一篇文献综述  12-33
  第1章朊蛋白研究概况  12-26
    1.1 朊病毒的发现及命名  12-14
    1.2 人类朊病毒疾病  14-16
    1.3 细胞朊蛋白的结构及生理功能  16-22
    1.4 朊蛋白同源蛋白  22-24
    1.5 朊病毒研究有待解决的问题  24-26
  第2章酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用  26-33
    2.1 蛋白质组学的产生背景  26-28
    2.2 酵母双杂交系统的建立和发展  28-31
    2.3 酵母双杂交常用的载体系统  31
    2.4 酵母双杂交系统的局限性  31-32
    2.5 双杂交系统在蛋白质组研究中的应用  32-33
第二篇研究内容  33-73
  第1章诱饵质粒及猎物质粒的构建  33-49
    1.1 材料与方法  33-43
    1.2 结果  43-47
    1.3 讨论  47-48
    1.4 小结  48-49
  第2章诱饵质粒与猎物质粒的可行性检验及互作  49-65
    2.1 材料与方法  49-57
    2.2 结果  57-61
    2.3 讨论  61-63
    2.4 小结  63-65
  第3章用免疫共沉淀进一步验证蛋白间的互作  65-73
    3.1 材料与方法  65-69
    3.2 结果  69-70
    3.3 讨论  70-72
    3.4 小结  72-73
结论  73-74
参考文献  74-80
中文摘要  80-82
Abstract  82-84
致谢  84-86
导师简介  86-88
作者简介  88

应用酵母双杂交系统对PrP蛋白与Shadoo蛋白互作的研究

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