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猪脂蛋白脂酶基因敲除成纤维细胞系的构建

作　者: 江瀚
导　师: 曾凡勤
学　校: 吉林大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 脂蛋白脂酶基因敲除胚胎成纤维细胞转染猪
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase,LPL)是由脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成和分泌的一种酰基甘油水解酶,是脂蛋白代谢的关键酶。当任何原因导致LPL活性下降,必将引起人体的脂代谢紊乱,诱发多种心脑血管疾病。在自然界中存在脂蛋白脂酶基因突变会导致的血浆乳糜微粒大量蓄积、极低密度脂蛋白水平增高、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平降低等脂代谢紊乱的典型症状。猪在血液学,血液动力学方面与人类很相似,因此成为是研究人类心血管疾病的最佳动物模型。因此可以通过对脂蛋白脂酶进行突变、缺失、敲除等遗传修饰,构建转基因克隆猪,为进一步研究心血管疾病奠定基础。本实验主要对脂蛋白脂酶基因敲除的猪胚胎成纤维细胞系进行建立,结果为:(1)采用PCR法从长白猪基因组中扩增得到猪脂蛋白脂酶内含子Ⅱ和内含子Ⅲ,长分别为约7.5kb和2.1kb;(2)经PCR、酶切鉴定及测序验证检测并成功构建了猪脂蛋白脂酶基因敲除置换型载体pSSC-Larm-Sarm;(3)将获得的载体经脂质体LipofectamineTM2000介导的方法转染猪胚胎成纤维细胞,G418和GANC筛选获得双抗性细胞,经PCR鉴定确定筛选到的细胞为基因敲除细胞。总之,本实验研究结果表明在猪胚胎成纤维细胞中进行脂蛋白脂酶基因敲除的技术方法可行,为进一步获得脂蛋白脂酶基因敲除猪奠定了基础。

全文目录

内容提要  4-7
前言  7-9
第一篇文献综述  9-22
  第1章心血管疾病与脂蛋白脂酶的研究进展  9-17
    1.1 心血管疾病的研究进展  9-12
    1.2 脂蛋白脂酶的研究进展  12-16
    1.3 脂蛋白脂酶与心血管疾病的关系  16-17
  第2章转基因动物及基因打靶技术的研究进展  17-22
    2.1 转基因动物的研究进展  17-19
    2.2 基因打靶技术的研究进展  19-21
    2.3 转基因动物与人类疾病模型  21-22
第二篇实验内容  22-57
  第1章猪脂蛋白脂酶基因敲除载体的构建  22-44
    1.1 材料和方法  22-37
    1.2 结果  37-42
    1.3 讨论  42-43
    1.4 小结  43-44
  第2章猪脂蛋白脂酶基因敲除成纤维细胞系的建立  44-57
    2.1 材料与方法  44-51
    2.2 结果  51-54
    2.3 讨论  54-56
    2.4 小结  56-57
结论  57-58
参考文献  58-67
致谢  67-68
详细摘要  68-70
Abstract  70-72
导师简介  72

猪脂蛋白脂酶基因敲除成纤维细胞系的构建

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