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Ⅲ型前列腺炎患者纳米细菌快速检测方法的研究

作　者: 唐金元
导　师: 周占松
学　校: 第三军医大学
专　业: 外科学
关键词: 纳米细菌 Ⅲ型前列腺炎 PCR
分类号: R697.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景及目的:根据1995年NIH分类,Ⅲ型前列腺炎即非细菌性前列腺炎,或者又称慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合症(chronic prostatitis / chronic pelvic cavity pain symptom ,CP/CPPS)。区别于I型、II型前列腺炎是前列腺液(expressed prostatic secretion, EPS)镜检和培养均未发现细菌,而IV型前列腺炎为隐匿性前列腺炎。III型前列腺炎是男性的常见病,多发病,约占泌尿外科门诊的1/4。但是病因不明确,因此治疗效果不佳。近来人们针对III型前列腺炎各种可能病因,如神经系统、自身免疫、雄激素受体等相关因素,进行了广泛深入研究,但均未能取得一致结论,也不能合理解释III型前列腺炎各种临床症状及辅助检查结果。临床上常用抗生素、a-受体阻滞剂等药物联合治疗III行前列腺炎患者,并取得一定疗效。因此,推测其可能存在一种未知病原微生物感染与III型前列腺炎相关。诸多学者经过广泛深入研究,发现一种新的病原微生物--纳米细菌(nanobacteria)与III型前列腺炎有密切关系,且进一步相关动物实验等研究基本证实其为III型前列腺炎一种病因。但是纳米细菌独特的生物学行为为其临床检测及实际应用,指导临床工作带来了障碍。纳米细菌是最近发现纳米级病原微生物,呈球状或杆状,直径约100-500nm。纳米细菌在普通病原微生物培养条件不能生长,只能采用细胞培养基培养增殖。纳米细菌增殖周期较长,约3-4周培养才能肉眼见到菌斑。而其独特的生物矿化现象使其外周覆盖一层由羟基磷灰石构成坚硬的外壳。因此常规方法不能检测,临床检测纳米细菌更加困难。目前纳米细菌检测鉴定仅限定在实验范围内,而且基本都是培养增殖后检测,无各种检测方法综合比较研究,更无临床实际应用及商品化的检测手段。因此找寻一种可靠,快速的适用于III前列腺炎的检测方法,具有重要的临床应用价值。方法:1.本研究从临床150例Ⅲ型前列腺炎患者的前列腺液中过滤方法分离纳米细菌,分别直接采用间接免疫荧光(indirect immuno?uorescence staining ,IIFS)、茜素红钙染色、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction ,PCR)基因扩增等方法检测及研究,并以培养后间接免疫荧光方法(indirect immuno?uorescence staining after culture ,IIFSC)为基准,对各检测方法进行比较评价。2.采用第一步筛选出的纳米细菌快速检测法对50例III型前列腺炎患者进行纳米细菌检测,并对检出纳米细菌感染患者予纳米细菌敏感药物四环素进行诊断性治疗,治疗效果判定采用公认的慢性前列腺症状评分(NIH-CPSI)标准。佐证该快速检测方法临床实际应用可靠性。结果:1.培养结果及纳米细菌IIFSC鉴定结果:培养4周观察,发现部分管底有纳米细菌贴壁生长,出现白色沉淀。所有培养标本离心后用IIFSC法鉴定纳米细菌阳性83例,检出率为55.3%。2. IIFS法:纳米细菌与小鼠的抗纳米细菌单克隆抗体8D10发生特异性结合,在荧光显微镜下可见阳性标本有绿色的杆状或颗粒分布纳米细菌。150例检测标本纳米细菌IIFS法检测有35例阳性,其检出率为23.3%。以IIFSC法为基准,IIFS法检出灵敏度42.2%,特异度为100%。IIFS法检出率明显低于IIFSC法(P<0.05)。3.茜素红钙染色检测法:油镜下观察纳米细菌体积极其微小,聚集成簇。150例标本中有32例纳米细菌茜素红钙染色法检测阳性,阳性率为21.3%。以IIFSC法为基准,茜素红钙染色法的灵敏度34.9% ,特异度为95.5%。茜素红钙染色检出率也明显低于IIFSC法(P<0.05)。4. PCR法:PCR法扩增纳米细菌16S rRNA基因,阳性标本可见1406bp特异性条带。扩增产物经克隆测序后与纳米细菌16S rRNA序列比对相似性达97%。150例样本中有86例纳米细菌PCR检测阳性,其检出率为57.3%。以IIFSC法为基准,PCR法检测灵敏度95.2% ,特异度为89.6%。PCR法检出率与IIFSC法相当(P>0.05)。5.采用PCR检测法检测临床III型前列腺炎新鲜前列腺液标本50例,其中30例纳米细菌感染阳性,纳米细菌感染病人经四环素抗纳米细菌治疗,其中1例失访。治疗总有效率为93.1%。治疗前后CPSI总评分下降程度为13.65±3.90,治疗效果显著(P<0.05)。这一结果基本佐证了PCR快速检测III型前列腺炎纳米细菌感染可靠性。结论及展望:1.III型前列腺炎检测纳米细菌感染,常规间接免疫荧光、钙染色检测纳米细菌灵敏度低,不适宜临床应用。2.III型前列腺炎检测纳米细菌感染,PCR法快速检测纳米细菌,其灵敏度及特异度均较好,能快速完成前列腺液标本纳米细菌检测,基本符合临床实际需要。3.进一步临床实际应用证实,PCR法检测阳性结果与临床III型前列腺炎纳米细菌感染四环素诊断性治疗结果相一致。佐证了PCR快速检测III型前列腺炎纳米细菌感染可靠性。也基本能满足III型前列腺炎患者纳米细菌感染临床检测需要。4.在III型前列腺炎患者中,采用PCR法检测纳米细菌感染,能满足临床诊断需要。为临床上针对Ⅲ型前列腺炎纳米细菌感染做到早诊断、早发现、早治疗提供了有力保障。

全文目录

英文缩写词表  4-5
英文摘要  5-9
中文摘要  9-12
前言  12-15
第一部分 Ⅲ型前列腺炎患者纳米细菌快速检测方法研究及临床评价  15-31
  材料与方法  15-22
  结果  22-27
  讨论  27-29
  小结  29-31
第二部分 PCR 检测法在III 型前列腺炎患者纳米细菌感染的临床应用  31-41
  材料与方法  31-34
  结果  34-37
  讨论  37-40
  小结  40-41
全文总结  41-42
致谢  42-43
照片  43-49
参考文献  49-55
文献综述纳米细菌及检测研究现状  55-64
  参考文献  60-64
攻读硕士学位期间发表论文  64

Ⅲ型前列腺炎患者纳米细菌快速检测方法的研究

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