学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

烟草青枯病菌的分子检测与烟草品种抗病性研究

作　者: 贾春燕
导　师: 张广民
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 烟草青枯病菌 PCR检测抗性鉴定
分类号: S435.72
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 157次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

烟草青枯病是是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum E. F. Smith)引起的以土壤传播为主的细菌病害,该病分布范围广、危害大,成为烟草生产上的一大毁灭性病害,给烟草生产带来巨大损失。烟草青枯病是典型的维管束病害,病菌多从根部侵入,根、茎、叶各部均可受害,最典型症状是枯萎,在田间,青枯病常常与烟草黑胫病、根结线虫病等病害混合发生,使为害更加严重。在防治青枯病的为害方面,目前生产上主要采用农业防治、药剂防治和生物防治的方法,但效果均不显著,缺乏特效的药剂和抗性品种,从长远来看,选育抗病品种才是控制烟草青枯病为害的根本出路。在发病前快速、准确地检测田间土壤中R. solanacearum的数量也是有效预防青枯病发生的策略之一。因此,本研究通过对烟草青枯病病菌的分子检测和品种的抗性鉴定,为青枯病的早期诊断和防治提供理论基础,对保障烟草的稳产优质和持续发展具有重要意义。主要研究结果如下:1.建立了一套快速、高效的检测鉴定烟草青枯病菌的PCR方法。本研究以采自山东烟区的烟草青枯病菌为目的菌株,提取基因组DNA,设计了一对特异引物RS-1/RS-2用于R. solanacearum的分子检测。利用该引物对包括R. solanacearum在内的12个烟草病原菌菌株的基因组DNA进行PCR扩增,结果表明:只有R. solanacearum能扩增得到290bp的特异性条带,其它菌株及阴性对照均无扩增产物。对烟草组织和土壤的检测结果也表明,该对引物能特异性地检测到R. solanacearum基因组DNA的存在。该引物对R. solanacearum基因组DNA检测的灵敏度为100fg/μL。2.分别对来自山东蒙阴、沂水、莒县等地12个田间土壤样品进行实际检测,结果与田间发病情况一致。3.采用不同的接种浓度和接种苗龄等对烟草青枯病苗期抗病性进行了测定,筛选出一套适用于烟草苗期的快速准确的抗病性鉴定方法。烟草青枯病苗期抗病性鉴定,采用1×108 cfu/mL的病原菌悬浮液,在苗龄六周进行伤根灌菌液接种,接种后第30天调查发病情况,能够反映不同材料对青枯病的抗病性差异。4.对24个烟草品种进行了青枯病的抗性鉴定,结果表明,供试品种均未表现免疫反应,不同烟草品种的抗病性有一定的差异。品种RG17抗病性最好,病情指数为26.11,中抗占20.8%,中感占54.2%,高感占25.0%。5.在24份烟草材料中选取不同抗性级别的材料4份,分别进行青枯病病原菌的接种处理,以无菌水为对照,测定接种后植株叶片内的SOD酶、POD酶、CAT酶、PPO酶和PAL酶等5种酶活性的变化,结果表明:受病原菌侵染后SOD都保持相对稳定;抗病品种POD活性明显增高;PPO活性的变化与品种抗病性表现呈正相关;PAL活性在不同的抗性品种中存在一定的差异,接种后各品种组织内PAL的活性有不同程度的提高;CAT活性在不同的抗病品种中存在较小差异,抗病强的品种在呈现上升趋势达到最高峰之后逐渐下降。

全文目录

缩略词及中英名称对照  6-12
中文摘要  12-14
Abstract  14-16
1 引言  16-30
  1.1 烟草青枯病概述  16-24
    1.1.1 烟草青枯病的发生与危害  16
    1.1.2 症状特点  16
    1.1.3 病原  16-17
      1.1.3.1 菌落和菌体形态  16-17
      1.1.3.2 病原菌的生理小种  17
    1.1.4 发病条件及发病规律  17-18
    1.1.5 致病机制  18-19
      1.1.5.1 生理机制  18
      1.1.5.2 致病相关基因  18-19
    1.1.6 抗病鉴定  19-20
    1.1.7 抗病机制  20-21
    1.1.8 烟草青枯病的防治研究  21-24
      1.1.8.1 生物防治  21-22
      1.1.8.2 药剂防治  22
      1.1.8.3 生态防治  22-23
      1.1.8.4 选用抗病品种  23
      1.1.8.5 加强田间管理  23-24
        1.1.8.5.1 合理轮作  23
        1.1.8.5.2 培育无病苗  23
        1.1.8.5.3 加强栽培管理  23
        1.1.8.5.4 搞好田园卫生  23-24
    1.1.9 研究展望  24
  1.2 烟草青枯菌检测研究现状  24-28
    1.2.1 传统组织分离方法  24
    1.2.2 血清学方法  24-26
      1.2.2.1 酶联免疫吸附法  24-25
      1.2.2.2 间接免疫荧光染色  25-26
    1.2.3 分子生物学方法  26-28
      1.2.3.1 分子杂交检测法  26-27
      1.2.3.2 PCR 扩增技术  27-28
  1.3 土壤中DNA 提取方法研究现状  28-30
  1.4 本研究的立题依据和目的意义  30
2 材料与方法  30-39
  2.1 烟草青枯病菌的分子检测  30-35
    2.1.1 材料  30-32
      2.1.1.1 供试菌株  30-31
      2.1.1.2 供试载体、宿主菌株  31
      2.1.1.3 主要仪器  31-32
    2.1.2 试验方法  32-35
      2.1.2.1 病原菌的采集与分离  32
      2.1.2.2 病原菌的致病性测定  32
      2.1.2.3 土壤的准备与接种  32
      2.1.2.4 基因组DNA 提取  32-34
        2.1.2.4.1 细菌基因组DNA 提取  32-33
        2.1.2.4.2 植物组织基因组DNA 提取  33-34
        2.1.2.4.3 土壤基因组DNA 提取  34
      2.1.2.5 特异性引物的设计及引物特异性验证  34-35
      2.1.2.6 发病组织青枯菌检测  35
      2.1.2.7 土壤中青枯菌检测  35
      2.1.2.8 引物灵敏度测试  35
      2.1.2.9 山东主产烟区土壤青枯菌检测  35
  2.2 烟草品种抗性鉴定  35-39
    2.2.1 供试材料  35-36
    2.2.2 抗病鉴定方法筛选  36-37
      2.2.2.1 接种方法  36
      2.2.2.2 病原菌接种浓度试验  36
      2.2.2.3 接种苗龄试验  36
      2.2.2.4 不同时期调查病情试验  36-37
    2.2.3 品种抗病性鉴定  37
    2.2.4 不同烟草品种接种烟草青枯病菌后五种酶活性的测定  37-39
      2.2.4.1 接种处理  37-38
      2.2.4.2 粗酶液的提取  38
      2.2.4.3 SOD 活性测定  38
      2.2.4.4 POD 活性测定  38
      2.2.4.5 CAT 活性测定  38-39
      2.2.4.6 PPO 活性测定  39
      2.2.4.7 PAL 活性测定  39
3 结果与分析  39-52
  3.1 烟草青枯病菌的分子检测  39-42
    3.1.1 特异性引物的设计  39
    3.1.2 引物特异性验证  39-40
    3.1.3 发病组织检测  40
    3.1.4 土壤中青枯菌检测  40-41
    3.1.5 引物灵敏度测试  41-42
    3.1.6 山东主产烟区土壤青枯菌检测  42
  3.2 烟草品种抗性鉴定  42-52
    3.2.1 抗病鉴定方法筛选  42-45
      3.2.1.1 不同接种浓度对苗期抗病性的影响  42-43
      3.2.1.2 病情调查时间的确定  43-44
      3.2.1.3 不同苗龄对苗期抗病性的影响  44-45
    3.2.2 烟草品种对R solanacearum 的抗性鉴定  45-46
    3.2.3 不同烟草品种接种烟草青枯病菌后五种酶活性的测定  46-52
      3.2.3.1 SOD 的活性变化  46-47
      3.2.3.2 POD 活性变化  47-48
      3.2.3.3 CAT 活性变化  48-49
      3.2.3.4 PPO 活性变化  49-50
      3.2.3.5 PAL 活性变化  50-52
4 讨论  52-55
  4.1 烟草青枯病菌的分子检测  52
  4.2 烟草品种抗病性研究  52-55
结论  55-56
参考文献  56-65
附录  65-68
致谢  68-69
攻读学位期间发表的论文  69-70
硕士学位论文内容简介及自评  70

烟草青枯病菌的分子检测与烟草品种抗病性研究

内容摘要

全文目录

相似论文