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脂肪间充质干细胞向髓核样细胞定向分化的分子机制研究

作　者: 高春生
导　师: 方煌
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: 脂肪间充质干细胞( ADSCs) 髓核(NP)细胞共培养转化生长因子β1(TGF-β1)
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】探讨共培养环境中SD大鼠来源的髓核(nucleus pulposus, NP)细胞促使脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells, ADSCs)向NP样细胞定向分化的分子机制,为人类椎间盘退变性疾病的细胞移植治疗奠定基础。【方法】(1)150g SD雌性大鼠断颈处死,取腹股沟、肾周脂肪组织,0.1%胶原酶消化,体外接种培养,采用极限稀释法纯化ADSCs;同时取大鼠椎间盘髓核组织,采用组织块培养法培养NP细胞。(2)利用流式细胞术对ADSCs进行鉴定。同时对NP细胞进行Ⅱ型胶原抗体染色鉴定。(3)分别取第三代ADSCs和原代NP细胞,消化计数,调整细胞密度调至1×105/ml,ADSCs接种于六孔板中,NP细胞接种于BD培养池中;两种细胞按1:1比率通过非细胞接触共培养。(4)共培养2周后做TGF-β1受体免疫荧光检测,提取ADSCs RNA做逆转录PCR和实时荧光定量PCR检测。【结果】(1)流式细胞检测结果显示脂肪间充质干细胞Sca-1、CD44的阳性率分别为95.2%、99.7%,CD45、CD11b的阳性率分别为0.4%、1.5%。NP细胞Ⅱ型胶原抗体免疫染色阳性。(2)免疫荧光检测结果显示:共培养组荧光强度明显高于单纯ADSCs组。NP细胞分泌的细胞因子TGF-β1作用于ADSCs ,能促使ADSCs表面的TGF-β受体1的表达增加。(3)PCR检测结果显示:共培养环境中ADSCs在NP细胞的诱导下聚焦蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、sox-9等条带均明显亮于单纯ADSCs组;共培养组Smad3和Smad4基因的表达量要高于单纯ADSCs组。【结论】实验结果表明:共培养环境中NP细胞能促使ADSCs向NP样细胞分化。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
绪言  8
材料与方法  8-12
检测指标  12
结果  12-18
讨论  18-22
参考文献  22-24
综述  24-41
  参考文献  36-41
致谢  41-42

脂肪间充质干细胞向髓核样细胞定向分化的分子机制研究

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