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与牙周膜成纤维细胞间接共培养对大鼠骨髓间充质干细胞分化的影响

作 者: 代媛媛
导 师: 丁寅
学 校: 第四军医大学
专 业: 口腔临床医学
关键词: 骨髓间充质干细胞 牙周膜成纤维细胞 共培养
分类号: R780.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 32次
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内容摘要


【实验目的】本实验旨在观察通过与牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)间接共培养,诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向PDLFs分化的可行性。初步探讨PDLFs诱导BMSCs分化的机制:细胞间接触是否为必要条件,如果不接触能否诱导BMSCs定向分化?从而为BMSCs在体内分化提供一定的理论依据,为BMSCs作为牙周组织工程种子细胞的体外诱导分化条件提供一条新的思路。【内容及方法】采用全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs,通过观察细胞形态及生长特性、生长曲线、成骨及成脂肪诱导对其进行鉴定;酶消化法结合组织块法培养大鼠PDLFs ,通过波形丝蛋白、角蛋白免疫细胞化学染色及矿化诱导进行鉴定。建立间接共培养模型,设间接共培养BMSCs组(将BMSCs与PDLFs按1:1比例进行体外非接触式共培养),并设单独培养BMSCs组与单独培养PDLFs组为对照组。分别于共培养后的第3、5天,检测以上3组细胞的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性。于共培养第14天,终止培养。用半定量RT-PCR方法检测3组细胞的骨钙素(Osteocalcin ,OCN)、骨涎蛋白(Bone sialoprotein ,BSP)、Ⅲ型胶原(Collagen typeⅢ,COLⅢ)、Runx2的mRNA表达水平。【结果】间接共培养后BMSCs被诱导为牙周膜成纤维样细胞,表现出一些类似PDLFs的性质,包括ALP活性的降低,OCN、COLⅢ、Runx2 mRNA表达水平的升高以及BSP mRNA表达水平的降低。间接共培养组BMSCs的各检测指标与单独培养PDLFs组无统计学差别,与单独培养BMSCs组有统计学差别。【结论】通过体外非接触式共培养也可以诱导BMSCs向PDLFs分化。细胞间直接接触反应并非诱导BMSCs向PDLFs分化的必要条件,PDLFs的旁分泌调节信号也可单独对诱导BMSCs分化起作用。

全文目录


缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-12
文献回顾  12-21
正文 与牙周膜成纤维细胞间接共培养对大鼠骨髓间充质干细胞分化影响  21-36
  1 材料  21-22
  2 方法  22-29
  3 结果  29-33
  4 讨论  33-36
小结  36-37
参考文献  37-45
附录  45-48
个人简历和研究成果  48-49
致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 口腔科学 > 口腔病理学
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