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转录因子Foxp3在肝癌中的表达及其生物学功能的研究

作　者: 王莉
导　师: 梅铭惠；陈红松
学　校: 桂林医学院
专　业: 外科学
关键词: 肝细胞癌 Foxp3 共培养 shRNA 肿瘤免疫微环境
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的⑴明确Foxp3在肝癌细胞株中的表达。⑵上调以及沉默肝癌细胞系中Foxp3表达,明确肝癌细胞表达Foxp3对肿瘤微环境的影响。⑶上调以及沉默肝癌细胞系中Foxp3表达,进一步分析和验证肿瘤细胞Foxp3调控的下游靶基因及相关通路。方法⑴用常规RT-PCR和基因表达谱芯片检测Foxp3在10种HCC细胞系中的表达,进一步用western blots,免疫组化和流式细胞术验证其蛋白水平的表达,并用激光共聚焦对肝癌细胞株表达Foxp3进行组织定位。⑵构建Foxp3小干扰shRNA,对肝癌细胞系中Foxp3的表达进行沉默后,利用Transwell系统,将表达Foxp3的肿瘤细胞及用Foxp3 shRNA沉默后的肿瘤细胞分别与CD4~+ T及CD8+T细胞进行1:1共培养,同时设立两种细胞的直接及间接共培养组,不共培养的效益性T细胞为对照组,流式评价Foxp3表达及沉默后对共培养体系中免疫效应细胞的影响。(3)构建Foxp3全长质粒RNA,对肝癌细胞系中Foxp3进行过表达,利用Transwell系统,将表达Foxp3的肝癌细胞及用Foxp3全长质粒RNA过表达后的肿瘤细胞分别与CD4~+CD25- T及CD8+T细胞进行1:1共培养,同时设立两种细胞的直接及间接共培养组,不共培养的效益性T细胞为对照组,流式评价Foxp3正常表达及过表达对共培养体系中免疫效应细胞的影响。⑷分别收取肝癌细胞中Foxp3正常表达、Foxp3沉默后表达、Foxp3过表达后的肝癌细胞及培养上清,先用多因子流式检测培养上清中的细胞因子如IFN-γ、IL-2、IL-4、TGF-β等的表达;再用PCR及表达谱芯片对Foxp3转染肝癌细胞株内的细胞因子做进一步验证,初步明确Foxp3调控的下游靶基因。结果⑴Foxp3在几乎所有的HCC细胞系中均出现表达,Foxp3在不同细胞系表达细胞内定位不同。(2)共培养组与单独效应性T细胞组相比,共培养体系中Foxp3表达的肝癌细胞系可以显著抑制CD4~+T细胞及CD8+T细胞的增殖(P<0.05);并且这种抑制增值能力是细胞接触依赖的;间接共培养组无显著性差异(P>0.05)。(3)用shRNA沉默Foxp3在肝癌细胞系中的表达后可以引起IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-8, HLA-A, HLA-B, B2M和Jun的表达上调以及SMAD6, TGFb2, TGFb3的表达下调(与Foxp3过表达后的结果具有一致性)。(4)肝癌细胞Foxp3沉默后可上调T细胞中细胞内因子IL-17,IFN-γ的表达。结论在HCC细胞系发现Foxp3的表达;肝癌细胞株表达的Foxp3参与了肝癌细胞株对效应性T细胞抑制及活化的影响;肝癌细胞Foxp3的表达参与了对肿瘤细胞细胞因子表达的调控。

全文目录


中文摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
前言  8-10
1 转录因子Foxp3 在肝癌细胞株中的表达  10-32
  1.1 材料和方法  10-23
  1.2 结果  23-26
  1.3 讨论  26-30
  结论  30
  参考文献  30-32
2 肝癌表达Foxp3 在肿瘤微环境中的作用及其所调控下游靶基因的分析  32-45
  2.1 材料和方法  32-36
  2.2 结果  36-40
  2.3 讨论  40-42
  结论  42-43
  参考文献  43-45
3 总结论  45-46
综述  46-63
  综述参考文献  57-63
致谢  63-65
科研及论文发表  65
攻读硕士期间参与科研课题  65-66

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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