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利用抗脱落凋亡A549细胞筛选肿瘤转移相关基因及TC-1相关通路抑制剂对A549脱落凋亡影响

作　者: 苏凯
导　师: 王小平；张志培
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 肺癌 抗脱落凋亡 肿瘤转移 基因芯片 基因表达谱 信号转导通路 通路抑制
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


1994年Frisch SM报道了上皮细胞与细胞外基质(ECM)分离后细胞发生程序性死亡(凋亡)的现象,并将其命名为“anoikis”[1],即脱落凋亡/失巢凋亡。这种特殊形式的凋亡意义在于避免正常脱落的上皮细胞经脉管系统播散至其它脏器继续生长。而恶性肿瘤细胞却能打破这一正常的生理机制,使自身从原发部位脱落后不发生凋亡,而通过脉管系统迁徙到其它部位继续生长,甚至适应原本不适合原发部位正常组织生长的细胞外基质环境,形成转移瘤[2]。这种恶性肿瘤细胞的抗脱落凋亡现象,被广泛认为是肿瘤转移的重要原因。脱落凋亡/抗脱落凋亡现象的发生是一个非常复杂的过程,涉及多种细胞事件以及多个信号转导通路。部分肿瘤细胞存在的抗脱落凋亡现象本质是正常介导脱落凋亡的信号转导途径发生改变的结果。研究者通过制备肿瘤细胞悬浮细胞系,借以在体外模拟抗脱落凋亡现象,并与正常生长肿瘤细胞比较,已经发现整联蛋白相关的信号转导途径、死亡受体信号转导途径以及细胞骨架等在细胞的抗脱落凋亡过程中发挥重要作用。原癌基因ras、raf、rac和src的过表达,抑癌基因PTEN和p53的表达缺失亦参与此类细胞事件[3-4]。但直至目前,关于脱落凋亡/抗脱落凋亡的机理仍缺乏系统的认识,细胞的多样性以及肿瘤细胞的易突变性也使得不同的肿瘤细胞可能存在不同的抗脱落凋亡机制[5]。目的:应用高侵袭性肺腺癌A549细胞系,分别在贴壁与悬浮两种状态下培养,检测两种不同生长状态肺癌A549细胞系基因表达上的差异,旨在高通量地筛选肺癌抗脱落凋亡相关基因。并从中筛选肺癌转移密切相关的基因,为进一步研究肺癌转移侵袭性提供数据。并验证TC-1相关通路抑制剂对脱落凋亡影响。方法:利用多聚羟乙基甲基丙烯酸树脂(Poly-HEMA)处理培养皿,致细胞无法贴壁生长,建立抗脱落凋亡肺癌A549细胞系;利用北京博奥生物芯片公司的人类V2.0全基因组寡核苷酸微阵列芯片,检测其与正常贴壁生长A549细胞的基因表达差异性,筛选与肺癌转移相关基因。利用Sigma-Aldrich公司TC-1基因相关通路抑制剂PD176074处理悬浮及贴壁培养A549细胞,观察其对脱落凋亡/抗脱落凋亡的影响。结果:得到表达差异的基因745个,最终筛选出38个与肺癌转移密切相关的基因。其中相关基因TC-1通路抑制可明显降低肺癌A549细胞抗脱落凋亡能力。结论:成功建立抗脱落凋亡肺癌A549细胞系,筛选出转移相关差异表达基因,并验证筛选基因TC-1通路抑制确实可明显降低肺癌A549细胞抗脱落凋亡能力。为进一步研究肺癌转移相关信号转导通路及其他相关研究提供依据。

全文目录


缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
文献回顾  13-22
正文  22-32
  实验材料  22-23
  实验一 应用基因表达谱芯片从抗脱落凋亡肺癌A549 细胞中筛选转移相关基因  23-27
    1 材料  23
    2 方法  23-24
    3 结果  24-25
    4 讨论  25-27
  实验二 TC-1相关通路抑制剂对肺癌A549 细胞抗脱落凋亡能力的影响  27-32
    1 材料  27
    2 方法  27-29
    3 结果  29-30
    4 讨论  30-32
小结  32-33
参考文献  33-41
附录  41-47
个人简历和研究成果  47-48
致谢  48

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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