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罗格列酮对Aβ影响及其机制的研究

作　者: 武福军
导　师: 詹永乐
学　校: 安徽农业大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 阿尔痴海默病罗格列酮淀粉样蛋白 β分泌酶过氧化物酶增殖激活受体
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:研究罗格列酮对稳定转染瑞士突变株APP695的HEK293细胞分泌β-淀粉样蛋白的水平,细胞内淀粉样前体蛋白、β-分泌酶、过氧化物酶体增值激活受体γ表达的变化,并探讨β-淀粉样蛋白、淀粉样前体蛋白、β-分泌酶、过氧化物酶体增值激活受体γ变化间的关系,及其在阿尔痴海默病中的作用和可能的机制,为罗格列酮治疗阿尔痴海默病提供理论依据。方法:本实验中,HEK293细胞稳定转染瑞士突变株APP695,不同剂量和不同时间对细胞给以罗格列酮,用MTT法和LDH法测定罗格列酮对细胞活性的影响,使用ELISA法测定细胞外上清中Aβ42的产量,使用蛋白印迹测定细胞内淀粉样前体蛋白、β-分泌酶、过氧化物酶体增值激活受体γ的表达,观察罗格列酮对各个指标的影响。结果:研究发现,在HEK293细胞试验中,罗格列酮可以抑制β分泌酶的表达,激活过氧化物酶增殖激活受体,显著降低Aβ42水平,且具时间和剂量依赖性,但罗格列酮对细胞内APP的影响不大。结论:罗格列酮通过抑制β分泌酶激活PPARγ而降低Aβ42的水平

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
英文缩略语  9-11
1 综述  11-19
  1.1 老年痴呆症概述  11-16
    1.1.1 老年痴呆与淀粉蛋白沉积  11-13
    1.1.2 老年痴呆与炎症  13-14
    1.1.3 老年痴呆的治疗  14-16
    1.1.4 抗炎治疗AD 的研究  16
  1.2 罗格列酮的药理研究  16-18
    1.2.1 罗格列酮对炎症的影响  16-17
    1.2.2 罗格列酮对胰岛抵抗  17-18
  1.3 小结  18-19
2 材料方法  19-29
  2.1 实验材料  19-22
    2.1.1 试验细胞  19
    2.1.2 主要试剂及来源  19-20
    2.1.3 主要仪器  20
    2.1.4 溶液的配制  20-22
  2.2 细胞的培养  22
    2.2.1 细胞的复苏  22
    2.2.2 细胞的传代  22
    2.2.3 细胞的冻存  22
  2.3 细胞生长活力的测定---MTT 法  22-23
  2.4 细胞LDH 释放的测定---LDH 法  23
  2.5 酶联免疫吸附法/ELISA 法测定 Aβ42 的含量  23-25
    2.5.1 ELISA 的原理  24
    2.5.2 ELISA 的操作步骤  24-25
  2.6 蛋白的提取及定量  25-26
    2.6.1 单层贴壁细胞蛋白的提取  25
    2.6.2 蛋白定量  25-26
  2.7 蛋白免疫印迹/Western blotting  26-28
    2.7.1 Western blotting 基本原理  26-27
    2.7.2 Western blotting 操作步骤  27-28
  2.8 图像分析及结果统计  28-29
    2.8.1 图像分析：应用 Quantity One 软件对蛋白条带的光密度值进行分析，以各蛋白与内参Gapdh 的比较即可得到各蛋白表达的相对含量  28
    2.8.2 数据统计：结果均以平均数±标准差（x±s），统计方法采用单因素方差分析，采用 SAS 软件进行统计分析  28-29
3 结果  29-37
  3.1 罗格列酮对细胞生长的影响  29-30
  3.2 罗格列酮对细胞 LDH 释放的影响  30-31
  3.3 罗格列酮对细胞 Aβ42 的影响  31-33
  3.4 罗格列酮对 HEK293 细胞蛋白表达的影响  33-37
4 讨论  37-38
小结  38-39
参考文献  39-44
致谢  44-45
作者简介  45

罗格列酮对Aβ影响及其机制的研究

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