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线粒体融合素基因2突变体诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

作　者: 曾经纬
导　师: 郭小梅
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 线粒体融合素基因2 血管平滑肌细胞基因突变凋亡球囊损伤
分类号: R541.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨线粒体融合素基因2(mitofusin 2,Mfn 2)蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点突变后对血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法分别以携带全长Mfn2基因的重组腺病毒(Adv-Mfn2)、携带不同Mfn2基因PKA磷酸化位点突变体的重组腺病毒(Adv-Mfn2-S442A,Adv-Mfn2-S442D)和仅含有半乳糖苷酶基因的对照腺病毒(Adv-LacZ)感染大鼠血管平滑肌细胞,原位末端转移酶标记法检测细胞凋亡情况。构建大鼠颈动脉球囊损伤模型,分别用上述重组腺病毒感染损伤的颈总动脉段,以注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为未感染对照组,同时以假手术组作为正常对照组,分别于术后5、14天取材,应用免疫组化检测外源基因的表达,原位末端转移酶标记法检测凋亡细胞、HE染色行组织形态学分析。结果重组腺病毒感染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)60h后,Adv-Mfn2组和Adv-Mfn2-S442A组血管平滑肌细胞明显凋亡,而Control组、Adv-LacZ组和Adv-Mfn2-S442D组血管平滑肌细胞无明显凋亡。大鼠颈动脉球囊损伤术后5天,免疫组化证实Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A、Adv-Mfn2-S442D三组Mfn2蛋白表达水平明显增加,TUNEL染色显示Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A组凋亡细胞数较Control组、Adv-LacZ组和Adv-Mfn2-S442D组明显增加(P < 0.01);与Adv-Mfn2组相比,Adv-Mfn2-S442A组凋亡细胞数更多(P < 0.01)。术后14天, HE染色显示Adv-Mfn2组、Adv-Mfn2-S442A组内膜/中膜面积比明显低于Control组、Adv-LacZ组和Adv-Mfn2-S442D组(P<0.01);且Adv-Mfn2-S442A组内膜/中膜面积比值较Adv-Mfn2组更低(P< 0.01)。结论(1)高表达Mfn2基因可促进大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡;(2)Mfn2-S442A促凋亡作用更强,而Mfn2-S442D作用消失;(3)PKA磷酸化位点在Mfn2基因功能发挥中起重要作用;(4)Mfn2基因可能含有多个PKA磷酸化位点,该磷酸化位点突变可能是通过改变蛋白空间构象来影响Mfn2基因功能。

线粒体融合素基因2突变体诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

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