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小白菊内酯经泛素化途径抑制多发性骨髓瘤NF-κB活性的机制研究

作　者: 张静琼
导　师: 邹萍
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 多发性骨髓瘤小白菊内酯泛素化 NF-κB TRAF6
分类号: R733.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的小白菊内酯(PTL)是一种倍半萜内酯,对多种肿瘤细胞有杀伤作用,其抗瘤效应与抑制NF-κB的活性密切相关;多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞增殖性疾病,本课题小组前期的研究显示PTL有抗MM效应,其机制可能与PTL抑制MM中的NF-κB活性相关,其具体的分子机制尚不清楚。最新研究证实PTL可以通过影响信号通路中相关蛋白的泛素化来诱导细胞凋亡,本研究将从泛素化角度研究PTL抑制NF-κB活性的分子机制,探讨其在NF-κB路径中的潜在作用靶点。方法以多发性骨髓瘤(MM)RPMI8226细胞为体外细胞模型,予不同浓度PTL处理不同时间后,采用MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术(FACS)检测细胞的周期和凋亡,免疫沉淀法(IP)检测蛋白泛素化表达水平,采用免疫印迹(WB)检测总蛋白泛素化程度、胞浆中IκB-α的表达量和胞核中p65的含量,采用免疫荧光法(IF)检测加药前后p65入核的含量。结果PTL明显抑制RPMI8226的生长增殖,呈时间浓度依赖性(P<0.01),PTL处理的细胞凋亡率明显增高,各组间均有差异(P<0.01),荧光显微镜下可观察加入40μmol/L的PTL后DAPI染核发现核仁的破裂,核固缩,可见少量凋亡小体;PTL阻滞RPMI8226细胞的周期,阻滞在G2期;加入不同浓度的PTL培养24小时后的核蛋白中p65蛋白明显减少,呈浓度依赖性抑制(P<0.05),荧光显微镜下观察细胞滴片中核内p65的表达,发现p65在加入PTL处理后,转移入核减少; PTL减少胞浆中泛素化TRAF6和Nemo的表达,并呈浓度依赖性;PTL使胞浆中IκB-α表达量增多,且呈浓度依赖性(P<0.05);PTL作用后细胞内总蛋白泛素化程度减弱,减弱程度与PTL浓度呈正相关;通过计算机软件Autodock预测PTL能与TRAF6稳定结合。结论本实验证实了PTL对MM中的NF-κB活性有影响,其中E3连接酶TRAF6可能为PTL作用于NF-κB的靶点,PTL通过与TRAF6直接结合影响NF-κB通路的激活,达到抗MM的效应。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-13
材料与方法  13-26
结果  26-35
讨论  35-39
参考文献  39-43
综述  43-50
  参考文献  47-50
致谢  50-51

小白菊内酯经泛素化途径抑制多发性骨髓瘤NF-κB活性的机制研究

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