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白念珠菌IPF14030基因敲除菌和高表达菌的构建及功能研究

作　者: 麻志萍
导　师: 付守廷；姜远英
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药理学
关键词: 白念珠菌 IPF14030基因基因敲除基因高表达 ATP含量
分类号: R379
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 26次
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内容摘要

白念珠菌是一种重要的人类条件致病菌。在系统性真菌感染病例中，白念珠菌感染占70％～80％，其死亡率高达30％～50％，而近十年来，临床上耐药菌株不断增加，是临床上真菌感染治疗失败的主要原因。本文意在从基因水平上寻找新的多药耐药相关基因，为新一代抗真菌化合物提供靶标，以克服真菌耐药性。将未用药物诱导的DSY1024与氟康唑和氟奋乃静联合诱导一个月后的DSY1024(产生高度耐药表型)进行表达谱芯片杂交，分析结果发现IPF14030基因的mRNA表达显著增高，这提示：IPF14030基因可能与白念珠菌产生耐药性相关。为了探明IPF14030在白念珠菌耐药产生过程中发挥的作用，本文利用基因表达水平不同的菌株研究了IPF14030基因的功能。首先，采用Ura-Blaster基因敲除策略构建了IPF14030基因缺失菌；并采用PCR方法和southern杂交方法确证了IPF14030基因敲除成功；其次，用含有强启动子MET3的白念珠菌高表达载体pCaEXP构建了IPF14030基因高表达菌，并用Real-time荧光实时定量PCR验证了IPF14030基因表达增高；最后，利用IPF14030基因敲除菌、亲本菌、IPF14030基因高表达菌，从不同的基因表达水平考察了IPF14030基因对生长曲线、药物敏感性、菌丝形成和细胞内ATP含量的影响。研究结果显示：IPF14030基因对白念珠菌生长曲线，益康唑、伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、活力康唑及特比奈芬的药物敏感性、菌丝形成无显著影响，但细胞内ATP含量却随IPF14030基因表达增高显著减少。根据本研究结果推测：IPF14030基因可能与ATP的生成或利用有关，并与其他的耐药基因在耐药产生的过程中发挥协同作用。

全文目录

中文摘要  8-9
英文摘要  9-11
缩略词  11-12
第1章绪论  12-18
  1.1 研究背景  12-16
  1.2 立题依据  16-18
第2章 IPF14030基因敲除菌的构建及鉴定  18-47
  2.1 材料与方法  18-38
  2.2 实验结果  38-47
第3章 IPF14030基因高表达菌的构建及鉴定  47-62
  3.1 材料与方法  47-54
  3.2 实验结果  54-62
第4章 IPF14030基因的功能研究  62-71
  4.1 材料与方法  62-65
  4.2 实验结果  65-71
第5章讨论  71-75
第6章结论  75-76
参考文献  76-82
致谢  82

白念珠菌IPF14030基因敲除菌和高表达菌的构建及功能研究

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