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棉花黄萎病菌遗传多样性ISSR分析

作　者: 宋培玲
导　师: 杨家荣
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 植物病理学
关键词: 棉花大丽轮枝菌基因组正交设计优化 ISSR
分类号: S435.621
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 82次
引　用: 3次
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内容摘要

利用ISSR(Inter simple sequence repeat)分子标记技术对我国11个省(市)采集分离的48株棉花黄萎病菌进行了分子指纹分析,获得以下主要结果:1.采用CTAB和SDS两种方法对棉花黄萎病菌菌丝体所提取的DNA纯度进行比较,结果表明CTAB法优于SDS法。2.根据正交试验理论,成功设计并优化了棉花黄萎病菌ISSR技术体系。通过试验确定的棉花黄萎病菌ISSR最佳反应体系为:25μl的PCR反应体系中各反应成分为:l0×PCR buffer 2.5μl、200μmol/L dNTP、ISSR引物0.75μmol/L、1.5mmol/L Mg2+、Taq酶1U、40ngDNA模板、ddH2O。3.从25条ISSR随机引物中筛选出9条多态性好、条带稳定的引物,对不同地理来源的48株棉花黄萎病菌进行ISSR-PCR扩增,共获得2304条谱带,其中2208条为多态性条带,多态性比率为95.8%,表明ISSR标记在棉花黄萎病菌上具有较高的多态性。4.对ISSR遗传相似系数进行统计分析,得到其相关系数r=0.84,ISSR标记技术对棉花黄萎病菌遗传多样性的分析具有较高的一致性和可信度。5.供试的48个棉花黄萎病菌株标样的遗传相似系数变化范围为0.4737~0.9649,其中P92和S2的遗传相似系数最小,其遗传距离最远,S36与S53之间的遗传相似系数最高,它们之间的亲缘关系最近。6.对棉花黄萎病菌ISSR多态性标记进行聚类分析,结果表明,ISSR多态性与病原菌的落叶型有一定的相关性,而与形态类型、地理来源未表现出相关性。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
第一章文献综述  9-27
  1.1 棉花黄萎病的研究概况  9-17
    1.1.1 棉花黄萎病的发现、分布及危害状况  9
    1.1.2 棉花黄萎病病原菌种及寄主范围  9-10
    1.1.3 棉花黄萎病表现症状及发生特点  10
    1.1.4 棉花黄萎病致病机理  10-11
    1.1.5 棉花黄萎病病菌鉴定研究  11-14
      1.1.5.1 形态学鉴定  11-12
      1.1.5.2 营养亲和性研究  12-13
      1.1.5.3 同工酶技术研究  13
      1.1.5.4 免疫鉴定技术  13-14
      1.1.5.5 ISSR 分析  14
      1.1.5.6 ITS(Internal Transcribed Spacers)鉴定  14
    1.1.6 棉花黄萎病菌检测研究  14-16
    1.1.7 棉花黄萎病菌生理型研究  16-17
  1.2 遗传多样性研究  17-21
    1.2.1 植物病原真菌群体遗传学的内容和意义  17-18
    1.2.2 棉花种质资源  18-19
    1.2.3 棉花品种的遗传多样性研究  19-21
    1.2.4 棉花黄萎病菌的遗传多样性研究  21
  1.3 ISSR 分子标记技术  21-26
    1.3.1 分子标记的概念  21-22
    1.3.2 ISSR 分子标记技术的原理  22-23
    1.3.3 ISSR 分子标记技术的优点  23
    1.3.4 ISSR 的应用  23-26
      1.3.4.1 检测遗传多样性  23-25
      1.3.4.2 DNA 指纹库的建立  25
      1.3.4.3 遗传图谱的构建和基因定位  25
      1.3.4.4 ISSR 标记技术在遗传育种中的应用  25-26
  1.4 本研究的目的与意义  26-27
第二章引言  27-28
第三章材料与方法  28-34
  3.1 材料  28-29
    3.1.1 供试菌株  28
    3.1.2 供试试剂  28-29
    3.1.3 主要仪器  29
  3.2 方法  29-34
    3.2.1 菌丝体的培养  29
    3.2.2 棉花黄萎病菌DNA 的提取  29-30
      3.2.2.1 CTAB 法  29-30
      3.2.2.2 SDS 法  30
    3.2.3 DNA 浓度、纯度以及质量检测  30-31
      3.2.3.1 紫外吸收检测  30
      3.2.3.2 凝胶电泳检测  30-31
    3.2.4 引物的配制  31
    3.2.5 棉花黄萎病菌ISSR-PCR 最佳体系的建立  31-33
      3.2.5.1 ISSR-PCR 正交试验设计  31-32
      3.2.5.2 模板DNA 浓度的筛选  32
      3.2.5.3 退火温度的筛选  32
      3.2.5.4 棉花黄萎病菌基因组DNA 的ISSR-PCR 扩增  32
      3.2.5.5 ISSR-PCR 扩增产物的电泳检测  32-33
    3.2.6 数据处理与统计分析  33-34
第四章结果与分析  34-43
  4.1 基因组DNA 提取  34
  4.2 棉花黄萎病菌ISSR-PCR 最佳体系的建立  34-36
    4.2.1 ISSR-PCR 正交试验设计结果  34-35
    4.2.2 模板DNA 浓度的筛选结果  35
    4.2.3 退火温度的筛选  35-36
  4.3 棉花黄萎病菌基因组DNA 的ISSR-PCR 扩增结果  36-39
  4.4 棉花黄萎病菌基于ISSR 的遗传多样性分析  39-41
    4.4.1 遗传相似系数分析  39
    4.4.2 聚类分析  39-41
  4.5 ISSR 的多态性与落叶型、形态类型、地理来源之间的关系  41-43
第五章讨论  43-45
  5.1 棉花黄萎病菌基因组DNA 的提取  43
  5.2 ISSR 的稳定性与可行性  43
  5.3 ISSR 多态性与表型分类的相关性  43-45
第六章本文结论  45-47
参考文献  47-55
致谢  55-56
作者简介  56-57
附录  57

棉花黄萎病菌遗传多样性ISSR分析

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