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AtMYB2转录因子与CMO基因启动子相互作用的研究

作　者: 陈焕新
导　师: 李秋莉
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 拟南芥 AtMYB2 转录因子 CMO基因启动子 GUS分析
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


胆碱单加氧酶(CMO)是植物体内胆碱合成甜菜碱过程中的关键酶。甜菜碱是一种非毒性的渗透调节剂,在植物耐盐中起着重要的作用。CMO基因受盐诱导表达,随着环境中盐浓度的提高,其基因表达量增加,CMO基因的诱导表达与其启动子(pC:-267～+1 bp)有关。AtMYB2转录因子是一个受ABA和脱水诱导表达的MYB家族蛋白,它能与-CTAACCA-位点结合,促进下游基因的表达。pC序列上含有一个AtMYB2转录因子的识别位点。本文对AtMYB2转录因子和CMO基因启动子之间的相互作用进行研究,从而分析CMO基因的转录调控机制。本实验克隆了拟南芥的AtMYB2基因,并将该基因转入已含有pC的烟草中,对转基因烟草的GUS活性进行了组织化学染色及荧光定量分析分析,主要结果如下:1、用RT-PCR技术获得了拟南芥AtMYB2基因编码区,该编码区长822bp,编码一个由273个氨基酸组成的多肽。将获得的AtMYB2基因构建克隆载体pUC19-AtMYB2,冻融法导入大肠杆菌感受态细胞DH5α,得到E.Coli- pUC19- AtMYB2。2、构建植物表达载体pBI121-AtMYB2,导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404,获得工程菌LBA4404- pBI121-AtMYB2。3、采用农杆菌介导的叶盘转化法将AtMYB2基因导入转pC烟草,获得具有卡那霉素抗性的转双价基因烟草,PCR检测获得阳性植株。RT-PCR检测表明,AtMYB2基因已在转基因烟草中表达,GUS组织化学分析和GUS荧光定量分析表明,转基因烟草的GUS含量显著增高,说明AtMYB2转录因子能够与CMO基因启动子作用,增强该启动子的功能。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章 文献综述  8-17
  1 植物MYB2 转录因子  8-14
    1.1 植物MYB2 转录因子的结构特点  8-10
    1.2 MYB2 转录因子的识别位点  10-11
    1.3 植物MYB2 转录因子的进化  11-12
    1.4 植物MYB2 转录因子的功能  12-14
  2 植物转录因子功能的研究方法  14-16
    2.1 瞬间表达分析方法  14-15
    2.2 基因功能突变或转基因植物功能分析方法  15
    2.3 生物信息学方法  15-16
  3 本研究的目的和意义  16-17
第二章 AtMYB2 基因克隆及植物表达载体构建  17-31
  1. 实验材料  17
    1.1 植物材料  17
    1.2 试剂  17
    1.3 主要仪器设备  17
  2. 实验方法  17-23
    2.1 拟南芥总RNA 的提取  17-18
    2.2 AtMYB2基因的获得  18-20
    2.3 AtMYB2基因的克隆  20-22
    2.4 AtMYB2基因表达载体的构建  22-23
  3 结果与分析  23-30
    3.1 拟南芥总RNA 的提取  23-24
    3.2 AtMYB2基因的获得  24-25
    3.3 AtMYB2基因的克隆  25-27
    3.4 ATMYB2 植物表达载体的构建  27-30
  4 小结  30-31
第三章 工程菌的构建及烟草转化  31-44
  1 实验材料  31
    1.1 植物材料  31
    1.2 菌种  31
    1.3 试剂  31
    1.4 主要仪器设备  31
  2 实验方法  31-37
    2.1 植物表达载体转化根癌农杆菌  31-32
    2.2 根癌农杆菌介导转化烟草及抗性芽的筛选  32-33
    2.3 转基因植株的PCR 检测  33-34
    2.4 转基因植株的RT-PCR 检测  34
    2.5 转基因植株的GUS 组织化学染色检测  34-35
    2.6 转基因植株的GUS 荧光定量分析  35-37
  3 结果与分析  37-42
    3.1 冻融法转化农杆菌及检测  37
    3.2 农杆菌 LBA4404-pBI121-AtMYB2 转化烟草  37-38
    3.3 转基因植株的PCR 检测  38-39
    3.4 转基因植物的RT-PCR 检测  39-40
    3.5 转基因植株的GUS 组织化学染色检测  40-42
    3.6 转基因植株的GUS 荧光定量分析  42
  4 讨论  42-43
  5 小结  43-44
参考文献  44-48
附录  48-52
致谢  52

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
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