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小鼠Myosin X基因启动子的分析鉴定

作　者: 来明名
导　师: 朱筱娟
学　校: 东北师范大学
专　业: 遗传学
关键词: Myosin X 启动子
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

肌球蛋白X(Myosin X, Myo X)是最近发现的一种仅表达于脊椎动物中的非传统的肌球蛋白,分子量为240kDa左右。最近的研究表明,在大脑的发育过程中还表达一种分子量为165kDa左右的Myo X,同全长的Myo X相比,它同样具有三个PH结构域(pleckstrin homology domain),一个MyTH4结构域(myosin-tail homology 4 domain)和一个FERM(band-4.1/ezrin/radixin/moesin)结构域,但缺少头部动力区,完全被5’UTR(480bp)取代。这两种不同形式的Myo X是Myo X基因的不同的转录产物。为了分析Myo X基因的转录调控机制,我们分别选取全长和无头Myo X基因ORF(蛋白编码框)的5’侧翼区-2000bp,对它们进行了生物信息学的分析,并且成功的构建了荧光素酶报告基因质粒pGL3-FM(-1835/+314)和pGL3-HM(-1667/+327)。通过对它们在293细胞系中的荧光素酶活性检测分析,我们发现两者都具有启动子活性,但是无头Myo X 5’侧翼区-2000bp的序列的启动子活性相对于全长的较弱。接着我们对全长和无头Myo X的启动子进行了截短突变,发现他们的核心启动子区位于靠近转录起始位点的500bp内。为我们进一步研究Myo X的转录调控机制奠定了基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
引言  7-12
  1. 肌球蛋白X  7-8
  2. Myo X 的不同转录本  8-10
  3. 启动子的研究  10-12
材料与方法  12-18
  1. 实验材料  12
    1.1 细胞株  12
    1.2 质粒  12
    1.3 主要试剂和试剂盒  12
  2. 实验方法  12-18
    2.1 生物信息学分析的数据来源、分析方法  12-13
    2.2 小鼠基因组的提取  13
    2.3 报告基因质粒的构建  13-15
    2.4 缺失突变报告基因质粒的构建  15
    2.5 质粒的大量制备  15-16
    2.6 细胞培养  16
    2.7 细胞转染  16-17
    2.8 荧光素酶活性测定  17
    2.9 数据处理  17-18
结论  18-26
  1. 生物信息学分析结果  18-21
    1.1 转录因子结合位点分析  18-21
    1.2 CpG 岛分析及启动子活性分析  21
  2. 含有 Myo X 启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL3-FM(-1835/+314)和pGL3-HM(-1667/+327)的构建及鉴定  21-22
  3. Myo X 5’上游2kb 序列在293 细胞中的启动子活性检测  22-23
  4. Myo X 截短突变启动子的荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定  23
  5. Myo X 启动子的截短突变分析  23-24
  6. Myo X 启动子在不同哺乳动物细胞中的活性检测  24-26
讨论  26-28
参考文献  28-30
致谢  30

小鼠Myosin X基因启动子的分析鉴定

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