学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

基于JNK信号转导通路研究环维黄杨星D的肾毒性机制

作　者: 何苗
导　师: 许立
学　校: 南京中医药大学
专　业: 药理学
关键词: CVB-D 肾毒性 细胞凋亡 P-JNK HK-2 SP600125
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 11次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：观察长时间腹腔注射环维黄杨星D(CVB-D)对大鼠肾脏的毒性作用,探讨JNK信号转导通路在D (VB-D诱导肾脏和HK-2细胞凋亡中的作用,揭示CVB-D的肾毒性机制,为临床应用提供合理的依据。方法：1.80只大鼠随机分为正常对照组,CVB-D低、中、高剂量组(2.5、5和10mg·kg-1),每组20只。除对照组给予相同体积的溶媒溶液外,其余各组大鼠ip给予CVB-D八周,每日定时观察大鼠状态,分别在给药第四和八周末每组取10只大鼠,①颈总动脉取血分离血清,检测尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、钠(NA+)、钾(K+)、氯(Cl-)；②收集24h尿液记录尿量,检测N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、微量白蛋白(mAlb)、免疫球蛋白(IgG)和转铁蛋白(TRF)；③取肾脏组织做组织病理学检测；④原位末端标记(TUNEL)法观察各组肾脏细胞凋亡的情况；⑤免疫组化法检测肾脏中Caspase-3的表达量；⑥试剂盒检测肾皮质匀浆中Na+,K+-ATPase;⑦Western blot法测定肾脏细胞JNK/P-JNK信号蛋白表达的变化。2.①CVB-D16.25、32.5、65、130、260、520μM,分别作用于对数期的HK-2细胞12,24,48h后,应用MTT法检测CVB-D对HK-2细胞的抑制作用；②Hoechst染色法观察CVB-D32.5、65、130μM作用于HK-2细胞24h后,细胞核形态的改变；③AnnexinV/PI双染法观察CVB-D32.5、65、130μM作用于HK-2细胞24h和48h后,细胞凋亡率的变化；④Western blot法检测P-JNK、Smac/DIABLO和Caspase-3蛋白表达的变化；⑤取对数生长期HK-2细胞,SP600125预处理30min,再加65μM CVB-D作用HK-2细胞24h, MTT法检测细胞抑制率,Hoechst染色法观察细胞核的变化,Western blot法检测P-JNK蛋白表达的变化。结果：1.与对照组相比,ip注射CVB-D4周后,CVB-D中、高剂量组大鼠血清中BUN和CREA含量显著升高,尿液中IgG和TRF含量均显著升高(P<0.05,P<0.01)；而高剂量组尿液中NAG和β2-MG的含量也明显增加(P<0.05),低剂量组尿液中的β2-MG和IgG含量显著升高(P<0.05),HE检测可见肾小管的水样变性；连续ip注射CVB-D8周后,CVB-D中和高剂量组雌性大鼠体重与对照组比较明显下降(P<0.05, P<0.01); CVB-D各剂量组大鼠血清中BUN含量显著增加, CVB-D中和高组大鼠血清中CREA浓度明显的升高；同时,CVB-D高剂量组尿量明显增加；低剂量组尿液中的β2-MG和IgG含量均显著升高；中剂量组β2-MG和TF含量均显著升高；高剂量组的β2-MG、IgG和TRF含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),HE检测可见肾小管的变性和肾间质炎的产生,并且随着剂量的增加,出现的比例和症状加重TUNEL法结果显示,CVB-D能够引起大鼠肾脏细胞的凋亡,其中CVB-D2.5mg·kg-1剂量组凋亡指数与对照组比较有差异(P<0.05),5和10mg·kg-1剂量组与对照组比较有显著的差异(P<0.01)；免疫组化结果显示,给药8周后,CVB-D组Caspase-3表达量增加,其中CVB-D10mg·kg-1剂量组与对照组比较有明显的增加(P<0.05)；大鼠肾皮质中的Na+-K+-ATPase活性与对照组比较显著降低,并呈现明显的剂量依耐性,CVB-D5.0和10mg·kg-1剂量组与对照组比较明显下降(P<0.05, P<0.01)。Western blot结果显示CVB-D各剂量组JNK蛋白变化与对照组比较没有差异。空白组P-JNK表达较少,而CVB-D5.0和10mg·kg-1剂量组P-JNK的表达明显上调(P<0.05,P<0.01),具有一定的浓度依耐性。2.MTT法结果显示,CVB-D对HK-2细胞生长的抑制呈剂量和时间依耐性；Hochst染色显示,CVB-D处理24h后的HK-2细胞在荧光显微镜下可以观察到核聚缩和核破碎等典型的凋亡现象；凋亡现象通过Annexin V/PI双染流式细胞法检测得,CVB-D作用HK-2细胞后,主要出现凋亡现象,且凋亡率随着CVB-D浓度的增加而增加,具有时间和剂量依耐性；CVB-D作用HK-2细胞24h后Western blot法显示,CVB-D能够促进P-JNK的磷酸化,且具有剂量依赖性,CVB-D还能够上调Smac/DIABLO和Caspase-3的表达；SP600125+CVB-D组与CVB-D组比,凋亡率明显下降(P<0.01),细胞核聚缩等凋亡现象减少,且P-JNK的表达也降低。结论：1)长期腹腔注射CVB-D,可产生大鼠肾脏毒性,并且有一定的时间、剂量依赖性,毒性机制可能与其引起肾小管和肾小球滤过膜损伤有关；2)CVB-D对肾脏的毒性作用表现为诱导肾脏细胞的凋亡和抑制生物膜的活性,凋亡机制可能与其上调Caspase-3的表达和引起JNK的磷酸化有关；3)CVB-D通过激活JNK,从而促使线粒体释放促凋亡因子Smac/DIABLO,并上调Caspase-3的表达,提示CVB-D可能参与线粒体介导的HK-2细胞内源性凋亡途径。

全文目录


目录  5-7
摘要  7-9
Abstract  9-12
前言  12-17
  参考文献  15-17
第一章 环维黄杨星D的肾脏毒性及机制研究  17-47
  第一节 环维黄杨星D的肾脏毒性研究  17-31
    摘要  17
    1. 实验材料  17-18
    2. 实验方法  18-19
    3. 实验结果  19-29
    4. 讨论  29-30
    5.参考文献  30-31
  第二节 环维黄杨星D的肾毒性机制  31-47
    摘要  31
    1. 实验材料  31-32
    2. 实验方法  32-38
    3. 结果  38-43
    4. 讨论  43-45
    5. 本章小结  45-46
    参考文献  46-47
第二章 环维黄杨星D通过JNK信号通路介导HK-2细胞损伤的研究  47-65
  摘要  47
  1. 实验材料  47-49
  2. 实验方法  49-52
  3. 结果  52-61
  4. 讨论  61-63
  5. 本章小结  63-64
  6. 参考文献  64-65
全文小结  65-66
中药肾毒性研究进展  66-74
  参考文献  71-74
附录  74-75
攻读硕士期间发表论文状况  75-76
致谢  76

相似论文

  1. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  2. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  3. 醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究,X174
  4. 地克珠利对柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子甘油醛-3-磷酸脱氢酶的影响,S858.31
  5. PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探,S858.28
  6. β-catenin在猪卵巢组织中的表达以及对猪卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇生成酶的影响,S828
  7. 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
  8. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  9. 沉默BMPR-IB基因对猪卵巢颗粒细胞凋亡及BMP通路相关基因表达的影响,S828
  10. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对鸡软骨细胞增殖、分化及凋亡的影响,S858.31
  11. Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,S865.13
  12. 磷脂酶C和D在木聚糖酶诱导的水稻悬浮细胞抗病反应中的作用,S511
  13. 骨髓间充质干细胞血肿周边移植对大鼠脑出血的治疗作用及相关机制的探究,R743.34
  14. ERK1/2和JNK信号通路对大鼠再生肝8种细胞的增殖和凋亡调控作用研究,Q418
  15. 藁本内酯对抗D-半乳糖和过氧化氢致氧化应激损伤的神经保护作用,R285.5
  16. 重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应及其对IL-2、IFN-γ、GCs、T细胞凋亡的影响,R392
  17. 大鼠肝再生与肝硬化发生的基因转录谱相关性及其意义研究,R575.2
  18. 大鼠肝再生与非酒精性脂肪肝发生的基因转录谱相关性及其意义研究,R575.5
  19. 大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛病理变化与细胞凋亡相关因子AKT、JNK的表达研究,R743.34
  20. 大鼠肝再生与肝肿瘤发生的基因转录谱相关性及其意义研究,R735.7
  21. 大鼠肝再生与急性肝衰竭发生的基因转录谱相关性及其意义研究,Q418

中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
© 2012 www.xueweilunwen.com