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沉默PIG11基因对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

作　者: 陈永春
导　师: 庄英帜
学　校: 南华大学
专　业: 肿瘤内科
关键词: PIG11 caspase-8 Bcl-2 凋亡 HepG2细胞
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 9次
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内容摘要


目的：利用本实验组已构建的人PIG11的miRNA表达载体,建立PIG11基因稳定低表达的人肝癌HepG2细胞株,并联合已建立的PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,研究Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用,进一步探讨PIG11基因表达诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法：利用前期已构建的质粒转染HepG2细胞,获得稳定PIG11蛋白低表达的HepG2细胞。RT-PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平鉴定转染HepG2细胞后PIG11的表达情况。与前期已建立的稳定高表达PIG11蛋白的HepG2细胞模型作对比,利用MTT法和平皿克隆实验鉴定细胞的生长情况。细胞培养,分组：HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2(pLXSN-PIG11转染PIG1l基因HepG2细胞)、pLXSN-HepG2(pLXSN转染对照组HepG2细胞)、miR-PIG11-HepG2(miRNA干扰PIG11基因HepG2细胞)、miR-HepG2(干扰对照组HepG2细胞)。Hoechst33342染色荧光和PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测Caspase-8蛋白、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：转染后成功获得PIG11低表达的细胞株。Hoechst33342染色荧光显微镜下pLXSN-PIG11-HepG2细胞组可见核染色质浓缩,核碎片,荧光增强,以及凋亡小体。PI染色流式细胞仪检测结果显示：HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞、pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为5.72%±0.81%、1.34%±0.71%、5.10%±0.40%、34.83%±2.29%、5.34%±0.60%。PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞组凋亡率比其它各组增高(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低(P<0.01)。Western blot检测结果显示PIG11高表达的HepG2细胞caspase-8蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调(P<0.01),PIG11氏表达的HepG2细胞Caspase-8蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P<0.01)。结论：沉默PIG11基因能促进HepG2细胞增殖和抑制其凋亡cPIG11诱导HepG2细胞凋亡可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调Caspase-8蛋白表达相关。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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