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热应激下鸡下丘脑HSP90和GPR23基因mRNA表达及SNPs检测

作　者: 韦培培
导　师: 姜润深
学　校: 安徽农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 热应激淮南麻黄鸡文昌鸡相关基因 SNP
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

热应激是影响鸡生产性能的重要因子之一，本研究基于前期获得的基因芯片表达谱分析结果，针对已经筛查到的与鸡热应激相关的候选基因（HSP90，GPR23和ITGA8）开展进一步的功能研究。1.持续热应激后恢复常温过程中HSP90与GPR23在不同群体中的mRNA表达情况：分别选取8周龄健康强健的淮南麻黄鸡（H）和文昌鸡（W）公鸡各126只，将室温快速提升至(35±1)℃并以此时作为热应激起始(0h)，持续高温(35±1)℃处理72h后恢复正常室温（24±1℃）。采集两个品种高温处理0、12、24、72h及恢复常温后12、24、72h各时间点18只个体的下丘脑组织。利用荧光定量PCR技术，检测HSP90，GPR23基因在H和W下丘脑组织中各时间点的表达量变化情况。结果发现，HSP90持续高温72h至恢复常温72h过程中，在H和W下丘脑组织中的表达趋势相似：均表现为先上升后下降趋势，24h表达丰度最高，且HSP90在H下丘脑各时间点中的表达量均高于W。GPR23在H中的表达情况为：随着高温持续时间的延长，0-72h的表达量持续升高，72h表达量达到最高，室温恢复正常后12-72h，表达量逐渐降低。在W下丘脑中的表达量在高温处理的0-24h表达量急剧上升，24h达到最高峰（P<0.05），之后表达量呈逐渐下降的趋势。2.SNPs检测：通过DNA直接测序的方法，对候选基因（HSP90、GPR23、ITGA8）的外显子及部分内含子区域进行SNP位点检测，分别在HSP90的W4-87、GPR23的A2-767G和ITGA8的A4-2798G位置各发现一个突变位点。通过比对发现HSP90W4-87位于第四外显子，但此位点的突变并未引起氨基酸的改变。其他两个突变位点分别位于GPR23的第2和ITGA8的第4内含子内。3个突变位点在H和W中均处于Hardy-Weinberg平衡状态。对各位点在H和W基因型差异比较分析中并未发现差异显著基因型（P>0.05）。结论：HSP90、GPR23在H和W下丘脑中的表达量在持续高温处理后恢复常温过程中，均发生了规律性的变化，初步推断HSP90、GPR23与热应激调控有关，但具体分子机制有待进一步研究。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-11
文献综述  11-31
  1.1 引言  20
  1.2 材料与方法  20-21
    1.2.1 试验动物  20
    1.2.2 主要仪器设备  20-21
    1.2.3 主要药品与试剂  21
    1.2.4 软件工具  21
  1.3 试验内容  21-25
    1.3.1 样品采集  21
    1.3.2 提取 RNA  21-22
    1.3.3 反转录为 cDNA  22-23
    1.3.4 实时荧光定量（Q-PCR）  23-25
  1.4 试验结果与分析  25-28
    1.4.1 RNA 质量检测  25-26
    1.4.2 荧光定量结果与分析  26-28
  1.5 讨论  28-29
    1.5.1 高温应激下试验鸡 HSP90mRNA 表达规律分析  28-29
    1.5.2 高温胁迫下试验鸡 GPR23mRNA 表达规律分析  29
  1.6 结论  29-31
第二章热应激相关分子标记的筛选  31-38
  2.1 前言  31
  2.2 试验材料和方法  31-33
    2.2.1 试验动物与样品采集  31
    2.2.2 主要试剂  31-32
    2.2.3 主要仪器设备  32
    2.2.4 血液 DNA 的提取  32-33
    2.2.5 引物设计和 PCR 扩增  33
    2.2.6 SNPs 筛选与基因分型  33
    2.2.7 数据统计和分析  33
  2.3 结果与分析  33-36
    2.3.1 DNA 的提取  33-34
    2.3.2 PCR 扩增结果  34
    2.3.3 测序结果与分析  34
    2.3.4 基因遗传多样性分析  34-35
    2.3.5 基因型差异比较分析  35-36
  2.4 讨论  36-37
  2.5 小结  37-38
全文结论  38-39
参考文献  39-45
致谢  45-46
作者简介  46
研究生阶段发表文章  46-47
附件  47-48

热应激下鸡下丘脑HSP90和GPR23基因mRNA表达及SNPs检测

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