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大鼠脑基底动脉EDHF反应及外源性EDHF对脑缺血再灌注损伤的保护作用

作　者: 宋标
导　师: 陈志武
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 内皮依赖性超极化因子过氧化氢 11,12-环二十碳三烯酸硫氢化钠缺血再灌注损伤
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

内皮依赖性超极化因子(endothelium-derived hyperpolarizing factor, EDHF)是一种内皮源性的血管舒张因子,是除NO和PGI2外控制血管自我稳定性的第三种舒张血管的自体活性物质。目前,在多种不同种类动物及人体内的多处不同的血管中都发现存在EDHF反应,但血管中的EDHF到底是那种物质,现在还不是很清楚,尤其是在脑血管中,EDHF的化学本质还存在许多争议问题。内源性硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)是新近发现的第3个气体信使分子,具有多种生物学和生理学效应,是一种重要的内源性血管舒张因子。本实验室研究表明在大鼠基底动脉中,H2S具有EDHF样作用。本实验拟对其抗脑缺血再灌注损伤的保护作用进行探讨。目的:1.探讨过氧化氢(H2O2)和11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)在内皮依赖性超极化因子(endothelium-dependent hyperpolarizing factor, EDHF)介导的大鼠脑基底动脉舒张中的作用。2.探讨大鼠脑基底动脉内皮细胞假定的EDHF(H2S)合成酶——胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase, CSE) mRNA的表达。3.探讨外源性EDHF对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法:1.采用离体血管舒缩功能测定实验,检测H2O2、11,12-EET及过氧化氢酶(CAT)等对大鼠离体脑基底动脉血管环的舒张作用。2.运用胰蛋白酶及胶原酶消化基底动脉获取单细胞混合悬液,磁珠分选法(magnetic cell separation system, MACS)分离纯化基底动脉内皮细胞,采用RT-PCR的方法检测正常大鼠基底动脉内皮细胞中内源性合成硫化氢的酶CSE的表达。3.以硫化氢钠(NaHS)为H2S的供体,采用线栓法复制局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型,评价动物行为功能,测定脑梗死范围,脑组织中含水量、乳酸脱氢酶(LDH)的活性和丙二醛(MDA)的含量;采用HE染色法观察脑组织病理结构的改变。结果:1.在30 mmol/L的KCl预收缩的大鼠脑基底动脉环上,ACh可产生浓度依赖性的舒张作用;血管用NO合酶抑制剂(L-NAME,3×10-5 mol/L)和PGI2合酶抑制剂(Indo,10-5 mol/L)预处理后,ACh对基底动脉仍存在部分舒张作用,即非NO和非PGI2介导的舒张。应用L-NAME和Indo后,11,12-EET对大鼠基底动脉无明显的舒张作用,H2O2仅有轻微舒张作用,但CAT对ACh介导的非NO和非PGI2反应没有影响。2.采用磁珠法分离纯化得到正常大鼠生理状态下基底动脉内皮细胞,采用RT-PCR的方法检测结果显示大鼠基底动脉内皮细胞中有CSE mRNA表达。3.在局灶性脑缺血再灌注损伤中,NaHS(0.195、0.39、0.78 mg/kg)能明显缩小缺血再灌注后脑梗死体积,改善神经功能状态,降低脑含水量, NaHS(0.195、0.39、0.78 mg/kg)能减少局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血清MDA、降低LDH的活性。NaHS(0.195、0.39、0.78 mg/kg)能够不同程度的改善脑缺血再灌注大鼠脑组织病理结构的改变。结论:1.在大鼠基底动脉中ACh介导的EDHF反应即非NO和非PGI2介导的舒张中不涉及H2O2和11,12-EET。2.磁珠法分离纯化的大鼠基底动脉内皮细胞中,有内源性合成的酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase, CSE) mRNA的表达,提示大鼠脑基底动脉中存在有假定的EDHF——H2S生成反应条件。3. NaHS对缺血再灌注性脑损伤具有较好的保护作用,提示外源性EDHF——H2S有抗脑缺血损伤作用。

全文目录

英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-14
1. 前言  14-16
2. 实验材料  16-18
  2.1 实验动物  16
  2.2 药品与试剂  16-17
  2.3 仪器与设备  17-18
3. 实验模型与方法  18-27
  3.1 离体血管舒缩功能测定实验  18-21
  3.2 免疫磁珠法分离纯化大鼠基底动脉内皮细胞  21-22
  3.3 RT-PCR 方法检测内皮细胞中CSE mRNA 的表达  22-25
  3.4 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型  25-27
  3.5 统计学方法  27
4. 实验结果  27-37
  4.1 大鼠脑基底动脉舒张作用的EDHF 反应  27-30
    4.1.1 ACh 对大鼠基底动脉的舒张作用及其介导的非N和非PG12反应  27-28
    4.1.2 11,12-EET 对基底动脉的舒张作用  28-29
    4.1.3 H_2O_2 对基底动脉的舒张作用  29
    4.1.4 CAT对非NO和非PG12介导的ACh舒张作用的影响  29-30
  4.2 大鼠基底动脉内皮细胞分离纯化结果  30-31
  4.3 大鼠基底动脉内皮细胞中CSE mRNA 的表达  31
  4.4 外源性EDHF 对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响  31-37
    4.4.1 NaHS 对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经缺陷评分响  31-33
    4.4.2 NaHS 对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织含水量响  33
    4.4.3 NaHS 对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积的影响  33-34
    4.4.4 NaHS 对局灶性脑缺血再灌注大鼠血清中 LDH 活性和MDA含量的影响  34-35
    4.4.5 NaHS 对全脑缺血再灌注大鼠脑组织形态学的影响  35-37
5. 讨论  37-42
6. 结论  42-43
参考文献  43-49
附录  49-50
致谢  50-51
综述  51-60
  参考文献  58-60

大鼠脑基底动脉EDHF反应及外源性EDHF对脑缺血再灌注损伤的保护作用

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